细胞分裂周期蛋白42结构域突变真核表达质粒的构建与鉴定

作     者：李振玲 王帝 宋远见 王玉兰 Li Zhenling;Wang Di;Song Yuanjian;Wang Yulan

作者机构：徐州医科大学解剖学教研室徐州221004 徐州医科大学遗传学教研室徐州221004 

基　　金：国家自然科学基金(81671208) 

出 版 物：《解剖学杂志》 (Chinese Journal of Anatomy)

年 卷 期：2019年第42卷第3期

页      码：249-252页

摘      要：目的:构建细胞分裂周期蛋白(Cdc42)的结构域突变质粒,即鸟嘌呤核苷酸交换因子(GEF)结构域突变质粒。方法:根据NCBI中小鼠Cdc42全长cDNA序列找到结构域GEF,将GEF的氨基酸突变成丙氨酸,根据突变后的序列设计引物,PCR扩增得到目的片段588bp,限制性内切酶EcoRI和HindⅢ双酶切后插入到编码红色荧光蛋白(RFP)和his标签的真核表达载体PM-his-RFP中,构建PM-his-Cdc42(GEF)-RFP重组质粒,进行酶切电泳及DNA测序验证。用脂质体介导方法将重组质粒瞬时转染HT22细胞,通过荧光显微镜观察转染效率。结果:经酶切及测序结果显示突变后结构域插入的位置和序列正确,成功构建Cdc42蛋白GEF结构域突变质粒;荧光结果表明,重组质粒顺利转染HT22细胞。结论:成功构建的Cdc42结构域突变质粒为Cdc42蛋白的功能研究提供有效的操作工具。

主 题 词：细胞分裂周期蛋白 鸟嘌呤核苷酸交换因子 结构域 真核表达质粒 突变 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1001-1633.2019.03.007

馆 藏 号：203692206...