从江香猪源干扰素γ植物表达载体构建及在生菜中瞬时表达

作     者：田浪 温贵兰 张升波 杨佰启 李昌红 徐丽 陈广 张喜懿 TIAN Lang;WEN Gui-lan;ZHANG Sheng-bo;YANG Bai-qi;LI Chang-hong;XU Li;CHEN Guang;ZHANG Xi-yi

作者机构：贵州大学动物科学学院预防兽医实验室贵州贵阳550025 贵州省动物生物制品工程技术研究中心贵州贵阳550016 

基　　金：国家自然科学基金(31460668) 贵州省科学技术基金(黔科合J字2046号) 贵州省高层次创新型人才培养(黔财教号) 贵州大学博士基金(贵大人基合字(2013)12号) 贵州省研究生工作站计划项目([GZZ2017002]) 贵州省科技平台及人才团队计划(黔科合平台人才5253) 

出 版 物：《中国畜牧杂志》 (Chinese Journal of Animal Science)

年 卷 期：2019年第55卷第7期

页      码：96-100页

摘      要：为构建从江香猪源干扰素γ(IFNγ)植物表达载体,通过农杆菌真空渗透法在新鲜生菜中实现瞬时表达。参考GenBank登录的猪IFNγ基因序列设计1对特异性IFNγ引物,采用RT-PCR方法从贵州从江香猪源肝脏组织扩增IFNγ基因序列,将其克隆至植物表达载体PBI121,转化根癌农杆菌LBA4404,筛选阳性菌株提取质粒,对重组质粒进行PCR扩增、双酶切及测序鉴定;携带重组质粒根癌农杆菌真空渗透法感染生菜,GUS染色检测感染的生菜叶片,ELISA检测感染生菜叶片中从江香猪源IFNγ蛋白,分析重组质粒在生菜中表达效果;采用细胞病变抑制实验检测生菜中从江香猪源IFNγ蛋白抗病毒活性。结果表明:本研究成功地从贵州从江香猪源肝脏组织扩增获得IFNγ基因序列并构建了从江香猪源IFNγ植物表达载体PBI121-IFNγ;GUS染色感染的生菜叶片可见蓝色物质;ELISA检测感染生菜叶片中从江香猪源IFNγ蛋白含量为169.397、170.657、170.37 pg/mL;生菜中表达从江香猪源IFNγ经4^-6稀释在Marc145细胞上仍能够抑制100 TCID50的PRRSV的致细胞病变作用。本实验成功构建从江香猪源IFNγ植物表达载体PBI121-IFNγ,生菜中瞬时表达蛋白具有免疫反应性和抗病毒活性,为从江香猪源IFNγ药用植物蛋白的研究开发提供参考依据。

主 题 词：从江香猪源干扰素γ 植物表达载体 生菜 瞬时表达 抗病毒活性 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.19556/j.0258-7033.2019-07-096

馆 藏 号：203692255...