Cas9蛋白的克隆表达、分离纯化及多克隆抗体制备

作     者：刘芳 卢婷 蔡梦迪 吴芳草 陈相好 王彩霞 崔古贞 陈峥宏 LIU Fang;LU Ting;CAI Mengdi;WU Fangcao;CHEN Xianghao;WANG Caixia;CUI Guzhen;CHEN Zhenghong

作者机构：贵州医科大学基础医学院微生物学教研室贵州贵阳550025 贵州省普通高等学校病原生物学特色重点实验室贵州贵阳550025 贵州医科大学医学检验学院贵州贵阳550004 

基　　金：贵州省研究生科研基金立项项目(11348) 国家自然科学基金项目(31760318,31500078,31560318,31601012,81460314) 贵州省科技计划项目[(2018)1132] 大学生创新训练项目(DC201710660022) 

出 版 物：《贵州医科大学学报》 (Journal of Guizhou Medical University)

年 卷 期：2019年第44卷第7期

页      码：757-761,766页

摘      要：目的:获得高纯度Cas9蛋白,制备Cas9蛋白特异性抗体。方法:以Cas9基因序列为模板,设计特异性引物,PCR扩增获得Cas9基因全长序列,利用无缝拼接技术构建pET28a-Cas9重组表达载体;转化***21(DE3),经IPTG诱导表达Cas9蛋白,并利用His-Tag技术分离纯化Cas9蛋白;将纯化获得的Cas9蛋白免疫新西兰大白兔,制备Cas9蛋白多克隆抗体。结果:pET28a-Cas9重组表达载体转化的***21(DE3)可表达Cas9蛋白,纯化的Cas9蛋白免疫家兔得到的多克隆抗体效价>1∶256 K。结论:本研究获得了高质量Cas9蛋白及多克隆抗体,为后续CRISPR-Cas9基因编辑的应用奠定了良好的基础。

主 题 词：Cas9蛋白 蛋白表达与纯化 多克隆抗体 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

D　O　I：10.19367/j.cnki.1000-2707.2019.07.003

馆 藏 号：203695916...