改进探针标记法斑点杂交在轮状病毒VP7分型中的应用

作     者：董慧瑾 钱渊 张又 陈冬梅 赵林清 刘立颖 DONG Hui-jin;QIAN Yuan;ZHANG You;CHEN Dong-mei;ZHAO Lin-qing;LIU Li-ying

作者机构：首都儿科研究所病毒研究室北京市感染与免疫中心实验室北京100020 

出 版 物：《中国循证儿科杂志》 (Chinese Journal of Evidence Based Pediatrics)

年 卷 期：2009年第4卷第5期

页      码：436-441页

摘      要：目的建立一种更加简便的A组人轮状病毒(HRV)核酸斑点杂交VP7分型方法,以便用于对HRV流行情况进行调查。方法在HRVVP7编码基因各G基因型间高度变异而型内高度保守区域设计分型探针,在该区域的两侧相对保守区域设计一对通用引物,利用PCR分别将地高辛标记HRV5种常见型别(G1～4,G9型)的DNA探针,建立基于VP7的斑点杂交方法;选取经抗原检测和聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)检测均为HRV阳性的2006至2008年住院腹泻患儿粪便标本200份,RT-PCR扩增VP7全基因,并对扩增阳性产物应用斑点杂交方法进行G型别分析。结果建立的斑点杂交方法在5种型别探针间无交叉反应,各型探针的检测灵敏度可达到10pg。200份PAGE阳性标本中162份RT-RCR扩增VP7基因阳性,斑点杂交显示G1型41例(25.3%),G2型2例(1.2%),G3型63例(38.9%),G9型35例(21.6%),混合感染19例(11.7%),杂交未分出型2例(1.2%),未检测到G4型HRV。结论本研究所建立的斑点杂交方法敏感度和特异度强,适合在HRV大规模分子流行病学调查时应用。通过该方法的初步应用,发现北京地区婴幼儿HRV除了常见的G1、G2和G3型外,还有G9型感染。

主 题 词：A组人轮状病毒 地高辛 斑点杂交 G基因型 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 1010[医学-医学技术类] 100202[100202] 100215[100215] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1673-5501.2009.05.007

馆 藏 号：203696439...