甲型H1N1流感病毒实时荧光定量PCR标准阳性模板的构建

作     者：方盛藩 郑夔 李小波 苏锦坤 FANG Sheng-fan;ZHENG Kui;LI Xiao-bo;SU Jin-kun

作者机构：广东出入境检验检疫局检验检疫技术中心卫生检疫实验室广东广州510700 

基　　金：国家质检总局科研项目(2010IK222) 国家质检总局科技计划项目(2013IK223) 

出 版 物：《中国卫生检验杂志》 (Chinese Journal of Health Laboratory Technology)

年 卷 期：2015年第25卷第1期

页      码：1-3页

摘      要：目的制备甲型H1N1流感病毒核酸检测标准阳性模板,将其应用于日常甲型流感病毒荧光定量PCR(RTPCR)检测中。方法根据甲型H1N1流感病毒基因序列设计出M、HA、NA片段的全基因扩增引物,采用RT-PCR方法扩增以上3个基因片段,将3个目标片段分别连接到PGM-T载体上构建重组质粒,筛选出分别含M、HA、NA基因阳性质粒,将以上阳性质粒两两连接,最后制备成含M、HA、NA基因的标准阳性模板。结果此模板在-20℃保存3个月对荧光定量PCR结果无显著影响,具有较好的稳定性,Ct值最大变异系数为1.30%。使用该模板建立的定量范围为1×1010copy/ml^1×1019copy/ml,标准曲线方程为:y=-2.7232x+40.99。检测方法表明该标准阳性模板具有良好的特异性。结论本次制备成的标准阳性模板适用于各甲型H1N1流感病毒检测实验室的质量控制,可用于临床诊断。

主 题 词：甲型H1N1流感病毒 标准模板 荧光定量聚合酶链式反应 

学科分类：1004[医学-公共卫生预防医学类] 100401[100401] 10[医学] 

馆 藏 号：203696983...