白纹伊蚊β-肌动蛋白实时定量PCR方法的建立与分析

作     者：阎婷 赵彤言 董言德 李春晓 YAN Ting;ZHAO Tong-Yan;DONG Yan-De;LI Chun-Xiao

作者机构：军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 

基　　金：国家自然科学基金项目(No.30700691) 

出 版 物：《寄生虫与医学昆虫学报》 (Acta Parasitologica et Medica Entomologica Sinica)

年 卷 期：2010年第17卷第4期

页      码：224-227页

摘      要：采用T-A克隆技术,在白纹伊蚊β-肌动蛋白的基因序列上设计引物,PCR扩增后将特异性产物连入T载体中,提取质粒,经测序分析验证后,测定浓度,稀释获得标准品,采用SYBR green法进行实时定量PCR,并绘制标准曲线,作为白纹伊蚊各种基因实时定量PCR检测中的内参照物.结果表明：利用此标准品制备的标准曲线具有较高的扩增效率和良好的线性关系（斜率为-3.3287,R2=0.9980）;实时定量PCR熔解曲线分析表明,温度在83℃±0.5℃的PCR产物是白纹伊蚊肌动蛋白序列上的特异性产物,表明此标准品是白纹伊蚊肌动蛋白特异性的.本实验成功建立白纹伊蚊β-actin基因实时定量PCR方法,可作为内参照物运用于白纹伊蚊基因差异表达的研究.

主 题 词：白纹伊蚊 肌动蛋白 实时定量PCR 内参照物 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 071007[071007] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1005-0507.2010.04.007

馆 藏 号：203703122...