siHybrids技术沉默铜绿假单胞菌外排泵mexB基因体外效应的初步研究

作     者：毛艳 陈佳 许东 邢铭友 王丽丽 谢旭华 龚凤云 夏超 申爱霞 宋莹 占伟丽 宋建新 MAO Yan;CHEN Jia;XU Dong;XING Ming-you;WANG Li-li;XIE Xu-hua;GONG Feng-yun;XIA Chao;SHEN Ai-xia;SONG Ying

作者机构：华中科技大学附属同济医院武汉430030 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(30873189) 

出 版 物：《中华微生物学和免疫学杂志》 (Chinese Journal of Microbiology and Immunology)

年 卷 期：2011年第31卷第8期

页      码：707-712页

摘      要：目的初步研究siHybrids技术对铜绿假单胞菌野生菌PA01外排泵mexB基因体外沉默效应。方法针对铜绿假单胞菌野生株PAOI外排泵mexB基因设计并合成3条特异性silly—brids分子和l条阴性对照siHybrids分子。在分子浓度为50nmol／L下，分别以合成的siHybrids分子干扰铜绿假单胞菌野生菌PA01，并设实验组为铜绿假单胞菌野生菌PA01空白对照组，阴性对照组scamble（SC）-001，干预组siHybrids（si）-001、siHybrids（si）-002及siHybrids（si）-003，分别在干预12h及24h后采用***法检测各实验组中靶基因mexB基因mRNA的表达水平。进一步采用Mueller-Hinton倍比稀释法检测50nmol／L浓度下，siHybrids分子干预铜绿假单胞菌野生菌PA01前后氯霉素（CP）、红霉素（EM）、左氧氟沙星（L-OFLX）、头孢他啶（CAZ）、美洛培南（MER）的最小抑菌浓度（Mm）值。结果不同siHybrids分子干预PA0112h后，mexB基因mRNA表达量无明显差异性；但干预24h后，mexB基因mRNA表达量：干预组（si-001，si-002，si-003）比空白对照组、阴性对照组（sc-001）有明显下降。对比干预12h、24h后mexB基因mRNA表达量，可以发现空白对照组、阴性对照组（sc-001）mRNA的表达量成上升趋势，而干预组（si-001，si-002，si-003）mexB基因mRNA表达量均呈下降趋势。siHybrids分子在干预铜绿假单胞菌野生菌24h前后的氯霉素（CP）、红霉素（EM）、左氧氟沙星（L—OFLX）、头孢他啶（CAZ）、美洛培南（MER）MIC无明显差异性。结论在mRNA表达水平上，siHybrids分子能体外干预铜绿假单胞菌PA01mexB基因mRNA表达，此种沉默作用呈现时间依赖性，且在24h能有效地发挥干预作用。

主 题 词：siHybrids技术 RNAi 铜绿假单胞菌 外排泵 Real-time PCR 

学科分类：1010[医学-医学技术类] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3760/cma.j.issn.0254-5101.2011.08.010

馆 藏 号：203703401...