SELEX技术中ssDNA文库PCR扩增条件的优化

作     者：曹立亭 许李丽 万向 王秋菊 马跃 

作者机构：西南大学荣昌校区动物医学系重庆荣昌402460 

基　　金：中央高校基本科研业务费专项资金资助项目(XDJK2011C026) 西南大学博士基金(09BSR04) 

出 版 物：《安徽农业科学》 (Journal of Anhui Agricultural Sciences)

年 卷 期：2012年第40卷第6期

页      码：3241-3242,3297页

摘      要：[目的]对SELEX技术中ssDNA文库的PCR扩增条件进行优化。[方法]采用L16(45)正交试验设计在4个水平上对影响单链随机DNA文库PCR反应体系的Mg2+浓度、dNTP浓度、TaqDNA聚合酶含量、引物浓度和随机单链DNA文库量5个重要因素进行了优化,同时对PCR反应的退火温度和循环次数进行了优化,确立最优反应体系和扩增程序。[结果]20μlPCR反应体系及反应程序中各因素优化组合为:10×Buffer2.0μl,随机ssDNA文库0.5ng,Mg2+2.5mmol/L,dNTP Mixture0.25mmol/L,上下游引物各0.6μmol/L,Taq DNA聚合酶1.5U;退火温度为68℃,最佳循环数为12。此反应系统下,随机ssDNA文库PCR扩增谱带清晰、稳定、特异性高。[结论]为SELEX技术中筛选到特异性更强的适配子奠定了基础。

主 题 词：随机单链DNA文库 正交试验设计 PCR 体系优化 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 1007[医学-药学类] 100705[100705] 07[理学] 071005[071005] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.0517-6611.2012.06.010

馆 藏 号：203703721...