利用RNAi技术稳定抑制ERβ表达的人成骨细胞株hFOB1.19细胞模型的建立

作     者：邓盎 张宏其 郭超峰 唐明星 刘少华 王昱翔 高琪乐 

作者机构：中南大学湘雅医院脊柱外科湘雅脊柱外科中心长沙市410008 

基　　金：湖南省自然科学基金项目(08JJ3057) 湖南省科技厅科技计划一般项目(08FJ3171) 

出 版 物：《中国脊柱脊髓杂志》 (Chinese Journal of Spine and Spinal Cord)

年 卷 期：2012年第22卷第8期

页      码：722-728页

摘      要：目的:探讨利用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术稳定抑制雌激素受体β(Estrogen receptorβ,ERβ)表达建立人成骨细胞株hFOB 1.19细胞模型的可行性。方法:设计3种特异性ERβ-shRNA,体外合成后将其克隆人pRNAT-H1.4/Retro逆转录病毒质粒中,并包装成逆转录病毒;ERβ-shRNA逆转录病毒瞬时感染hFOB l.19细胞后,通过流式细胞仪检测感染效率,并使用半定量RT-PCR和Western blot检测对ERβmRNA和蛋白表达的抑制效率;然后取ERβ抑制效率最高的hFOB l.19细胞,通过抗性筛选,将得到稳定感染的细胞扩大培养,再通过半定量RT-PCR和Western blot检测ERβ稳定抑制的效率;并应用MTT法检测ERβ稳定抑制后对细胞增殖的影响。结果:成功构建了3种ERβ-shRNA逆转录病毒载体;流式细胞仪检测结果显示,瞬时感染效率均高达70%以上;ERβ-shRNA-1、ERβ-shRNA-2、ERβ-shRNA-3逆转录病毒载体对hFOB l.19细胞中ERβmRNA的抑制率分别为(54.56±0.95)%、(69.60±1.12)%、(76.49±1.15)%,蛋白的抑制率分别为(59.21±4.44)%、(78.35±2.00)%、(85.60±2.66)%(均P0.05)。结论:利用RNAi技术可成功建立ERβ稳定抑制的hFOB l.19细胞模型。

主 题 词：RNA干扰 雌激素受体β 人成骨细胞 

学科分类：08[工学] 09[农学] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1004-406X.2012.08.12

馆 藏 号：203703915...