miR-20b慢病毒表达载体的构建及表达

作     者：朱莎莎 朱春 余章斌 韩树萍 朱金改 彭宇竹 

作者机构：南京医科大学江苏省210029 南京医科大学附属南京市妇幼保健院儿科 

基　　金：国家自然科学基金(81200126) 江苏省医学重点人才基金(RC2011021) 

出 版 物：《江苏医药》 (Jiangsu Medical Journal)

年 卷 期：2014年第40卷第2期

页      码：129-131,F0003页

摘      要：目的构建鼠miR-20b慢病毒表达载体,检测其在P19细胞中的过表达效果。方法设计并合成含有miR-20b成熟序列的编码短发卡状RNA(shRNA)的双链DNA。将shRNA克隆入慢病毒载体,与Pcgvp、Rev和Vsvg包装质粒共转染HEK-293T细胞包装病毒,收取病毒上清液,纯化后感染P19细胞。荧光倒置显微镜下观察感染效率,实时定量PCR检测慢病毒感染后miR-20b的相对表达量。结果经双酶切分析及测序验证,成功构建了miR-20b的过表达载体。慢病毒感染P19细胞的效率可达到70%以上,miR-20b表达水平明显升高。结论成功构建了鼠miR-20b的慢病毒表达载体,包被的病毒可以在P19细胞中实现过表达效果。

主 题 词：慢病毒 P19细胞 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 071007[071007] 

D　O　I：10.19460/j.cnki.0253-3685.2014.02.002

馆 藏 号：203704565...