两种新型快速检测猪SP-A基因方法的建立及对比

作     者：马妍妍 彭永刚 宋铭忻 崔尚金 MA Yan-yan;PENG Yong-gang;SONG Ming-xin;CUI Shang-Jin

作者机构：东北农业大学动物医学学院哈尔滨150030 哈尔滨兽医研究所哈尔滨150001 

基　　金：黑龙江杰出青年基金项目(JC201216) 

出 版 物：《黑龙江畜牧兽医》 (Heilongjiang Animal Science And veterinary Medicine)

年 卷 期：2014年第6期

页      码：25-29页

摘      要：为了研究如何提高SP-A基因表达量的检测效率,试验建立了实时荧光定量PCR法以及纳米金PCR方法,根据猪表面活性蛋白A(SP-A)基因的mRNA序列(NM_214265.1)设计并合成引物及配套TaqMan探针,采用猪SP-A基因CDS区全序列连接pMD-18T载体构建新质粒pMD-SPA为阳性标准品,扩增方程为:Y=-3.375X+40.41,扩增效率为98%,R2达到0.999,Ct值批内变异系数及批间变异系数都小于3%。标准品的Ct值与模板的起始浓度有良好的线性关系,最低检测浓度可达2.53×101copies/μL,沿用上述引物建立了纳米金PCR方法,摸索了该方法的最佳反应条件,并对其灵敏度进行了测定。结果表明:钠米金PCR法亦能扩增得到与试验设计相符的特异性条带,灵敏度与荧光PCR方法相当。

主 题 词：SP—A基因 实时荧光定量PCR TaqMan探针 纳米金PCR 

学科分类：0905[农学-林学类] 09[农学] 

D　O　I：10.13881/j.cnki.hljxmsy.2014.0379

馆 藏 号：203704702...