FoxM1 shRNA慢病毒载体构建及感染人前列腺癌细胞的稳定细胞株筛选

作     者：王一茹 姚斌伟 张艳 张明博 高菡静 唐杰 WANG Yiru;YAO Binwei;ZHANG Yan;ZHANG Mingbo;GAO Hanjing;TANG Jie

作者机构：解放军总医院超声科北京100853 解放军军事医学科学院放射与辐射研究所北京100850 

基　　金：国家自然科学基金(81471682)~~ 

出 版 物：《南方医科大学学报》 (Journal of Southern Medical University)

年 卷 期：2015年第35卷第9期

页      码：1227-1233页

摘      要：目的构建携带绿色荧光蛋白(GFP)的人Fox M1 sh RNA重组慢病毒载体,并构建筛选Fox M1敲低的人前列腺癌稳定细胞株,检测Fox M1的表达及对细胞增殖能力的影响。方法设计并合成3对特异性针对人Fox M1基因的sh RNA靶序列,构建到p HBLV-U6-Zs Green-Puro慢病毒载体中,测序鉴定载体构建情况,利用慢病毒三质粒系统转染包装293T细胞,荧光显微镜下观察转染效率。收集到的病毒上清转染人前列腺癌DU-145细胞,Real-time PCR检测各组细胞Fox M1 m RNA水平,经嘌呤霉素筛选建立Fox M1敲低稳定细胞株,用Western blotting法检测细胞中Fox M1表达,并用MTT法观察稳转细胞的生长增殖活性,流式细胞术观察稳转细胞凋亡情况,平板克隆实验观察稳转细胞的克隆形成能力。结果经测序鉴定成功构建了3对Fox M1sh RNA慢病毒载体,并进行包装,感染DU-145细胞后Real-time PCR检测结果表明第1对慢病毒载体干扰效率最佳,嘌呤霉素抗性筛选建立了Fox M1敲低稳定细胞株,荧光显微镜观察感染效率较高,Western blotting结果显示细胞中Fox M1蛋白表达明显受到抑制,细胞的生长增殖能力明显受限,流式细胞术结果显示Fox M1敲低组细胞凋亡率高于对照组,平板克隆实验结果表明Fox M1敲低组细胞克隆形成能力下降。结论本研究成功构建了Fox M1 sh RNA慢病毒载体,建立了Fox M1敲低稳定前列腺癌细胞株,抑制细胞内Fox M1的表达能够抑制前列腺癌细胞DU-145的生长增殖、克隆形成能力,并能诱导细胞凋亡。

主 题 词：Fox M1 前列腺癌 慢病毒载体 稳定细胞株 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3969/j.issn.1673-4254.2015.09.02

馆 藏 号：203705409...