利用杆状病毒表达系统表达奶牛触珠蛋白及其单克隆抗体的制备

作     者：向敏 程蕾 胡修忠 余婕 夏瑜 陶弼菲 熊海谦 周源 刘晓华 王定发 XIANG Min;CHENG Lei;HU Xiuzhong;YU Jie;XIA Yu;TAO Bifei;XIONG Haiqian;ZHOU Yuan;LIU Xiaohua;WANG Dingfa

作者机构：武汉市农业科学技术研究院畜牧兽医科学研究所武汉430208 黄冈梅家墩牧业有限责任公司湖北黄冈438800 

基　　金：国际科技合作计划项目(2017030209010261) 武汉市农业科学院创新项目(cx201719-6 cx201806) 

出 版 物：《黑龙江畜牧兽医》 (Heilongjiang Animal Science And veterinary Medicine)

年 卷 期：2019年第15期

页      码：18-22,176-177页

摘      要：为了建立奶牛早期妊娠诊断检测方法,试验用GenBank公布的奶牛触珠蛋白(haptoglobin)Hp基因序列设计引物,扩增出Hp基因全长片段,将Hp基因亚克隆至Bac-to-Bac昆虫/杆状病毒表达系统的供体质粒pFastBacHTb的多克隆位点中,转入含昆虫杆状病毒骨架质粒的***10Bac感受态细胞中,通过蓝白斑筛选获得穿梭质粒rBacmid-Hp阳性克隆,在脂质体介导下转染昆虫细胞sf9,获得含Hp基因的重组杆状病毒质粒rBacmid-Hp;用纯化的rBacmid-Hp蛋白免疫Balb/c小鼠,将免疫小鼠的脾细胞和鼠SP2/0骨髓瘤细胞融合,采用间接ELISA法和有限稀释法筛选杂交瘤细胞;分别用ELISA法、Western-blot检测单克隆抗体腹水效价及特异性。结果表明:在sf9细胞中成功表达Hp蛋白,该蛋白具有良好的生物学活性;制备了8株单克隆抗体,分别命名为3B12、4F4、4F11、5D7、5G8、7E5、10C3和12F9,腹水效价均在1∶5.12×10^4以上;亚类鉴定显示,除3B12、4F11、10C3为IgG2a外,其余单克隆抗体均属于IgG1;筛选出1对配对单克隆抗体,分别为12F9和4F11。说明Hp蛋白可在Bac-to-Bac昆虫/杆状病毒表达系统中高效表达,并成功筛选出一对配对的高效单克隆抗体。

主 题 词：奶牛 触珠蛋白 昆虫杆状病毒表达系统 单克隆抗体 sf9细胞 表达 

学科分类：090602[090602] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.13881/j.cnki.hljxmsy.2018.10.0154

馆 藏 号：203705969...