神经营养素-3基因的人工合成及其在毕赤酵母中的分泌性表达

作     者：张朝春 梁伟锋 杨希才 

作者机构：中国科学院微生物研究所北京100080 

出 版 物：《微生物学报》 (Acta Microbiologica Sinica)

年 卷 期：2004年第44卷第2期

页      码：210-214页

摘      要：根据人神经营养素 3(Humanneurotrohin 3,hNT 3)的基因序列 ,把编码氨基酸的密码子转换成毕赤酵母(Pichiapastoris)偏爱的形式 ,设计了 10条 36～ 5 9nt的寡聚核苷酸引物 ,通过 5次连续PCR反应 ,获得了人工合成的NT 3cDNA片段 (简称NT 3b基因 )。将合成的NT 3b基因克隆到pPIC9K质粒上 ,获得重组表达载体pPIC9K NT 3b。将重组表达载体pPIC9K NT 3b和pPIC9K hNT 3分别电击转化宿主毕赤酵母GS115菌株 ,经筛选得到重组转化子。不同转化子经甲醇诱导 ,表达产物进行SDS PAGE检测、Westernblot检测和ELISA分析 ,结果表明 ,NT 3b基因和hNT 3基因成功获得分泌性表达 ,从整体水平上 ,使用偏爱密码子的NT 3b基因在毕赤酵母GS115菌株中的表达明显优越于hNT 3基因 (x2 =4 .334,P <0 .0 5 ) ,表达量在诱导后 72～ 96h最高 ,达到 31mg L左右。

主 题 词：神经营养素-3 基因 人工合成 毕赤酵母 分泌性表达 偏爱密码子 真核蛋白表达系统 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

核心收录：

D　O　I：10.3321/j.issn:0001-6209.2004.02.018

馆 藏 号：203706152...