猪流行性腹泻病毒HB/FN株S基因的克隆、原核表达及免疫原性分析

作     者：王晨枫 左玉柱 裴丽华 杨震 范京惠 WANG Chen-feng;ZUO Yu-zhu;PEI Li-hua;YANG Zhen;FAN Jing-hui

作者机构：河北农业大学动物科技学院河北保定071001 

基　　金：国家自然科学基金项目(31272593) 

出 版 物：《动物医学进展》 (Progress In Veterinary Medicine)

年 卷 期：2013年第34卷第5期

页      码：21-25页

摘      要：根据GenBank中登录的猪流行性腹泻病毒(PEDV)经典毒株的S基因序列并参照pMD19-T载体序列,设计了一对分别引入限制性内切酶BamHⅠ和XhoⅠ酶切位点的引物,PCR方法从猪流行性腹泻病毒HB/FN株中扩增得到一条1 080bp的片段。将其连入pMD19-T载体中,经酶切鉴定并测序,测序结果和参考株S基因同源性高达100%。根据抗原性分析选择其抗原性较高的655bp基因片段分别插入到pET-28a(+)、pET-32a(+)、pGEX-6p-1中,构建3种不同的原核表达载体,经合适条件的IPTG诱导后SDS-PAGE分析,结果显示S基因在3种表达载体中均能表达,在pET-28a(+)中表达量最高,表达产物分子质量约为25ku。利用His标签的特性对重组蛋白进行纯化,Western blot证明蛋白可以与PEDV阳性血清产生特异性结合反应。用纯化的蛋白免疫小鼠,抗体检测显示S蛋白具有良好的免疫原性。

主 题 词：猪流行性腹泻病毒 S基因 原核表达 免疫原性 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1007-5038.2013.05.005

馆 藏 号：203709651...