荧光实时定量PCR检测铜绿假单胞菌外膜蛋白oprI基因的标准品的构建

作     者：钟礼立 张兵 贺蓉 林小娟 张爱民 蔡瑞云 段贞 

作者机构：湖南省人民医院湖南长沙410005 

出 版 物：《实用预防医学》 (Practical Preventive Medicine)

年 卷 期：2006年第13卷第2期

页      码：265-268页

摘      要：目的构建荧光实时定量PCR(FQ-PCR)标准品测定铜绿假单胞菌oprI基因,以此测定铜绿假单胞菌菌量。方法以铜绿假单胞菌的oprI基因为目的基因设计探针引物,提取细菌基因组DNA,与pMD 18-T Vector连接并转化到大肠杆菌中。用氨卞青霉素筛选出白色菌落,提取含目的基因质粒,并用HindⅢ限制酶进行线性化处理,通过直接PCR、OD值测定及DNA片段测序鉴定其特异性。根据OD值确定浓度,制备FQ-PCR梯度浓度参考标准品,做出标准曲线,检测各样品菌菌量。结果铜绿假单胞菌oprI基因的目的片段成功制备,获得稳定的重组质粒,保持了目的片段的特异性和序列完整性,并获得很好的标准曲线(相关系数0.994),成功检测了铜绿假单胞菌标准菌株、培养株的菌量,而大肠杆菌及阴性对照无扩增。结论成功构建FQ-PCR检测铜绿假单胞菌oprI基因的定量参考标准,荧光实时定量法可以快速检测铜绿假单胞菌。

主 题 词：铜绿假单胞菌 oprI基因 荧光实时定量PCR 标准品 

学科分类：1007[医学-药学类] 100705[100705] 1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1006-3110.2006.02.021

馆 藏 号：203711316...