p100蛋白慢病毒干扰载体及p100沉默的HepG2稳定细胞系的构建

作     者：黄丽 尹洁 丁建民 宋娟 高星杰 经翔 杨洁 HUANG Li;YIN Jie;DING Jianmin;SONG Juan;GAO Xingjie;JING Xiang;YANG Jie

作者机构：天津医科大学免疫教研室300070 天津医科大学基础医学研究中心300070 天津市第三中心医院 

基　　金：国家高技术研究发展计划(863计划)项目(项目编号:2007AA02Zll5) 国家自然科学基金资助项目(项目编号:30970582 31100967 31170830) 国家自然科学重大研究计划培育项目(项目编号:90919032) 国家教育部高等学校博士学科点专项科研基金(项目编号:20091202110001) 中国博士后科学基金(项目编号:2011M500529) 

出 版 物：《天津医药》 (Tianjin Medical Journal)

年 卷 期：2012年第40卷第6期

页      码：529-532,I0001页

摘      要：目的:用表达shRNA的干扰慢病毒载体系统构建p100基因稳定沉默的HepG2人肝癌细胞系。方法:通过RNAi序列设计软件进行p100干扰片段设计,筛选出p100基因的RNAi有效靶序列,进一步合成靶序列的OligoDNA并构建pLKO.3G-p100I慢病毒载体,用双酶切及测序进行鉴定。将构建好的p100shRNA表达质粒与慢病毒包装质粒共转染至包装细胞293T,包装产生病毒颗粒。运用病毒颗粒感染HepG2细胞,获得p100稳定沉默的细胞系。荧光显微镜下观察感染效率,利用Westernblot方法检测稳定细胞株中p100的沉默效果。结果:成功构建了具有p100干扰效果的慢病毒载体,并获得了稳定沉默p100及对照的HepG2细胞株。慢病毒感染HepG2细胞后,荧光显微镜下观察到90%以上细胞发出绿色荧光,Westernblot证实干扰p100后,HepG2细胞株中p100蛋白表达水平明显降低。结论:成功构建了具有p100干扰效果的慢病毒干扰载体及p100稳定沉默的HepG2细胞系。

主 题 词：RNA干扰 细胞系 肿瘤 质粒 慢病毒载体 p100蛋白 HepG2细胞系 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.0253-9896.2012.06.001

馆 藏 号：203711368...