增强型绿色荧光蛋白真核表达载体的构建和表达

作     者：李小月 何金生 沈继龙 宋蔚 汪学龙 胡元生 LI Xiao-yue;HE Jin-sheng;SHEN Ji-long;SONG Wei;WANG Xue-long;HU Yuan-sheng

作者机构：安徽医科大学病原生物学教研室 

基　　金：国家自然科学基金 (No. 30371320) 安徽省自然科学基金(No.03043601) 安徽省教育厅(No.2003kj182)项目 

出 版 物：《中国寄生虫病防治杂志》 (Chinese Journal of Parasitic Disease Control)

年 卷 期：2005年第18卷第1期

页      码：12-15页

摘      要：　目的　构建增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein, EGFP)编码基因的真核表达载体 pcDNA3.1(+) GFP,并观察其在Hep 2细胞中的表达情况。　方法　据已知的EGFP基因序列,设计合成 1 对引物,并引入Hind Ⅲ和EcoR Ⅴ酶切位点。应用PCR技术,从含有 EGFP的 pAdTrack CMV中扩增 EGFP编码基因。通过 TA连接将其克隆入pGEM T easy载体,经PCR及限制性内切酶鉴定后,插入真核表达质粒pcDNA3.1(+)中,转化Esche richia coli DH5α感受态细胞,于Amp+ LB平板上筛选阳性克隆。重组子经 Hind Ⅲ和EcoRⅤ双酶切、PCR鉴定,将该载体转染人喉癌细胞 Hep 2 后 48 h观察 EGFP表达情况。　结果　成功构建了含 EGFP 编码基因的真核表达载体pcDNA3.1(+) GFP,并成功转染Hep 2细胞,在倒置荧光显微镜下呈现绿色光。　结论　获得可产生绿色荧光的 EG FP,能方便地用作报告基因和筛选标记。

主 题 词：绿色荧光蛋白 真核表达 载体 表达 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1673-5234.2005.01.004

馆 藏 号：203712187...