真鲷虹彩病毒实时定量PCR检测方法的建立与应用

作     者：赵玉然 谭乐义 刘荭 赵巍 梁成珠 史秀杰 徐彪 朱来华 何俊强 岳志芹 ZHAO Yu-ran;TAN Le-yi;LIU Hong;ZHAO Wei;LIANG Cheng-zhu;SHI Xiu-jie;XU Biao;ZHU Lai-hua;HE Jun-qiang;YUE Zhi-qin

作者机构：山东出入境检验检疫局技术中心青岛266002 深圳出入境检验检疫局水生动物疫病国家重点实验室518010 

基　　金：国家质量监督检验检疫总局科研项目(2007IK267) 质检总局公益性项目(10-71)共同资助 

出 版 物：《渔业科学进展》 (Progress in Fishery Sciences)

年 卷 期：2011年第32卷第2期

页      码：111-116页

摘      要：以真鲷虹彩病毒(Red-sea breamiridovirus,RSIV)主要衣壳蛋白(Major capsid protein,MCP)的基因保守片段为靶序列,利用Pri mer Express3.0软件设计定量PCR引物,建立了RSIV的SYBR GreenⅠ实时定量PCR检测方法。将RSIV MCP基因连接pMD18-T载体,构建重组质粒,经过梯度稀释后作为标准品,根据标准品拷贝数(X)与Ct值的关系绘制了标准曲线,为Ct=-3.1841gX+40.270,相关系数R2=0.9969。熔解曲线分析表明,定量PCR产物的Tm值为82.5℃。该方法的检测限为2.20×102拷贝/反应,对流行性造血器官坏死病毒、淋巴囊肿病毒、蛙病毒3、甲鱼虹彩病毒都没有扩增反应,具有特异性。利用该方法对84批海水鱼类(石鲽、大菱鲆、鲈鱼)进行检测,其中5批鱼样品感染RSIV,并利用标准曲线对病毒含量进行了定量分析。

主 题 词：真鲷虹彩病毒 实时定量PCR 衣壳蛋白基因 SYBR GreenⅠ 

学科分类：0906[农学-水产类] 09[农学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1000-7075.2011.02.019

馆 藏 号：203718576...