猪繁殖与呼吸综合征病毒主要结构蛋白基因半定量RT-PCR方法的建立及其在RNA干扰研究中的应用

作     者：黄娟 单虎 HUANG Juan;SHAN Hu

作者机构：青岛农业大学动物科技学院山东青岛266109 

基　　金：青岛农业大学高层次人才启动基金(6630719) 国家科技支撑计划子课题(2009BADB4B04-1) 

出 版 物：《中国畜牧兽医》 (China Animal Husbandry & Veterinary Medicine)

年 卷 期：2012年第39卷第6期

页      码：22-26页

摘      要：为了建立以GAPDH基因为参照的半定量RT-PCR检测方法,根据PRRSV VR2332株病毒基因组和GAPDH序列设计4对特异性引物,分别扩增GP5、M、N和GAPDH基因序列,将shRNA表达质粒和GP5、M、N真核表达质粒共转染HEK293A细胞,应用该法检测了转染孔中GP5、M、N的相对表达量。同管和分管扩增法均建立了以GAPDH基因为参照的半定量RT-PCR检测方法。靶向GP5、M和N蛋白基因的shRNA表达质粒对其各自蛋白的抑制率为36%～69%,其中pSi-N3和pSi-G1抑制效果最为显著。结果表明,建立的半定量RT-PCR可以用于PRRSV主要结构蛋白基因表达水平的检测分析中。

主 题 词：PRRSV 结构蛋白 半定量RT-PCR RNA干扰 

学科分类：090603[090603] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1671-7236.2012.06.005

馆 藏 号：203719212...