奶牛黏附分子MadCam-1基因的克隆及原核表达

作     者：刘文博 陈媛媛 孙玲 李德朋 付云贺 张乃生 郭梦尧 杨正涛 LIU Wen-bo;CHEN Yuan-yuan;SUN Ling;LI De-peng;FU Yun-he;ZHANG Nai-sheng;GUO Meng-yao;YANG Zheng-tao

作者机构：吉林大学畜牧兽医学院吉林长春130062 吉林大学白求恩学院病原生物学实验室吉林长春130021 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(30972225) 

出 版 物：《中国畜牧兽医》 (China Animal Husbandry & Veterinary Medicine)

年 卷 期：2011年第38卷第8期

页      码：131-134页

摘      要：原核表达MadCam-1基因、纯化MadCam-1黏附蛋白,并制备其多克隆抗体,为进一步功能研究奠定基础。根据MadCam-1的已知基因序列设计并合成1对引物,应用PCR技术扩增MadCam-1基因片段插入到原核表达载体pGEX-4T-1中,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-MadCam-1,转化入***21(DE3),经IPTG诱导,对其产物进行SDS-PAGE分析和Western blotting鉴定,以纯化后的融合蛋白为抗原,免疫家兔,获得抗血清。结果表明,重组表达质粒pGEX-4T-1-MadCam-1经PCR及双酶切鉴定证明构建正确,测序结果与GenBank中登录的基因序列同源性为100%。表达产物经Western blotting鉴定,结果证实成功表达了分子质量约为50ku的蛋白质。纯化的蛋白质免疫家兔后,经ELISA检测多克隆抗体效价为1∶32000。因此,成功获得了奶牛MadCam-1多克隆抗体,为进一步研究奶牛黏附分子MadCam-1的功能奠定了基础。

主 题 词：MadCam-1 克隆 表达 纯化 多克隆抗体 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

馆 藏 号：203725356...