Exendin-4在大肠杆菌中的串联表达、纯化及活性鉴定

作     者：刘延杰 林鲁霞 宋长征 季虹 荣海钦 LIU Yan-jie;LIN Lu-xia;SONG Chang-zheng;JI Hong;RONG Hai-qin

作者机构：山东省内分泌与代谢病研究所山东省医学科学院山东济南250062 

基　　金：山东省科技攻关项目("重组肠促胰岛素样肽Exendin-4的研制" 编号:2009GG20002046"重组胰高血糖素样肽1(GLP-1)类似物的研制" 编号:2009GG20002049)资助 

出 版 物：《生物技术》 (Biotechnology)

年 卷 期：2011年第21卷第5期

页      码：40-44页

摘      要：目的:完成钝尾毒蜥Exendin-4基因在大肠杆菌中的串联高效表达。方法:按照大肠杆菌偏爱密码子设计Exendin-4基因片段,利用同尾酶构建多拷贝串联的表达载体,于大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,SDS-PAGE鉴定结果,表达产物Ni柱纯化后肠激酶切割,高效液相色谱及四级杆-飞行时间质谱纯化、鉴定,确定目标产物,作用胰岛瘤细胞INS-1检测胰岛素释放活性。结果:成功构建重组载体pET28a-(Exendin-4)n(n=2,4,6),且均获得可溶性表达产物,重组表达蛋白经切割、纯化、鉴定和制备,最终得到纯度98%的Exendin-4,其具有与标准品相似的促葡萄糖刺激的胰岛素释放活性。结论:试验成功利用串联表达方式制备有活性的Exendin-4,为下一步2型糖尿病治疗药物的研究奠定了基础。

主 题 词：Exendin-4 串联表达 纯化 胰岛素释放试验 2型糖尿病 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1004-311X.2011.05.122

馆 藏 号：203726646...