核仁磷酸蛋白基因NPM1敲除人宫颈癌细胞株的构建及功能

作     者：王昊然 白晓 闫丽 任燕红 孙威 商维昊 WANG Hao-ran;BAI Xiao;YAN Li;REN Yan-hong;SUN Wei;SHANG Wei-hao

作者机构：中国医科大学生命科学院表观遗传教研室 

基　　金：国家自然科学基金(31771502) 

出 版 物：《解剖科学进展》 (Progress of Anatomical Sciences)

年 卷 期：2019年第25卷第4期

页      码：353-356,360页

摘      要：目的通过CRISPR/Cas9系统定向敲除人类宫颈癌细胞(HELA)的核仁磷酸蛋白1基因(nucleophosmin1,NPM1),探讨敲除对HELA细胞生物学行为的影响。方法利用http://***在线设计工具设计sgRNA,通过T7E1系统筛选合适的sgRNA,将设计好的质粒通过转染的方式转入HELA细胞株,通过博来霉素(zeocin)抗生素进行筛选,通过Westernblot,PCR,基因测序等手段确认敲除细胞系的建立,通过免疫荧光的方式观察敲除细胞株。结果T7E1酶切PCR退火产物之后琼脂糖凝胶结果表明,CRISPR/Cas9系统对HELA细胞基因组进行了切割,并在同源重组时发生了碱基错配;Westernblot结果说明基因敲除后NPM1蛋白表达消失;基因测序的结果表明敲除细胞系建立的成功;免疫荧光的结果表明该细胞系出现异常核仁现象。结论NPM1敲除后细胞核仁异常,可能影响细胞正常生命进程。

主 题 词：核仁磷酸蛋白1 人类宫颈癌细胞 基因敲除 细胞增殖 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

D　O　I：10.16695/j.cnki.1006-2947.2019.04.002

馆 藏 号：203730338...