N端延伸的人肠生长激素类似物基因的合成、克隆及融合表达

作     者：李泰明 胡卓逸 刘景晶 马小驹 周慧 闵伟伟 LI Tai-Ming;HU Zhuo-yi;LIU Jing-Jing;MA Xiao-Ju;ZHOU Hui;MIN Wei-Wei

作者机构：中国药科大学生命科学与技术学院南京210009 

基　　金：国家高技术研究发展计划("八六三"计划)资助项目(No.2002AA217031-2) 国家自然科学基金资助项目(No.30270298) 江苏省自然科学基金资助项目(No.BK95092309) 江苏省社会发展基金助项目(No.BG2001011)~~ 

出 版 物：《中国药科大学学报》 (Journal of China Pharmaceutical University)

年 卷 期：2005年第36卷第4期

页      码：373-377页

摘      要：目的:合成、克隆及融合表达N端延伸2个Pro,并由Gly取代N端第2个氨基酸Ala的人肠生长激素类似物PP-h[Gly2]GLP-2,初步测定其促肠生长的生物学活性。方法:合成长度分别为53,54及53个碱基的三段寡核苷酸,以中段寡核苷酸为模板,两端寡核苷酸为引物,经PCR合成PP-h[Gly2]GLP-2基因,克隆于pUC18载体。经测序正确后,将该基因与融合表达载体pED连接构建融合表达质粒pEDGLP-2,转化***21(DE3),进行诱导表达,用SDS-PAGE分析。融合蛋白经分离纯化和酸切割后,分离获得PP-h[Gly2]GLP-2,用电喷雾质谱法测定其相对分子质量,并对雄性SD大鼠皮下给药14 d,初步测定其促肠生长活性。结果:诱导后融合蛋白表达量占菌体可溶性总蛋白的40%以上。电喷雾质谱法测得:经酸切割获得的PP-h[Gly2]GLP-2的相对分子质量为3 947.97 Da,与预测值3 947.38 Da基本一致。初步动物实验结果显示,0.5 mg/(kg.d)剂量组小肠增重百分比为41.65%,与PBS组相比具有显著差异。结论:制备获得的人肠生长激素类似物PP-h[Gly2]GLP-2,与设计的相对分子质量一致,有明显的促肠生长活性。

主 题 词：人肠生长激素类似物 融合表达 促肠生长活性 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 1007[医学-药学类] 1002[医学-临床医学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

核心收录：

D　O　I：10.3321/j.issn:1000-5048.2005.04.019

馆 藏 号：203731868...