HIV-1 ADA株gp140真核表达载体的构建与鉴定

作     者：李玉雪 王甲业 李庆海 李妍 凌虹 

作者机构：哈尔滨医科大学微生物学教研室黑龙江哈尔滨150081 

基　　金：教育部重点研究项目(206043) 黑龙江省自然科学基金重点项目(ZJY0601-0) 哈尔滨市科技创新人才研究专项资金项目(2006RFLXS021) 

出 版 物：《哈尔滨医科大学学报》 (Journal of Harbin Medical University)

年 卷 期：2007年第41卷第4期

页      码：303-305页

摘      要：目的构建Ⅰ型人类免疫缺陷病毒(HIV-1)ADA株包膜蛋白(gp140)真核表达载体。方法分别设计包膜蛋白和突变点两端的两对引物,采用重叠延伸剪接法,构建HIV-1ADA株包膜蛋白gp140突变体。获得的PCR产物与pMD18-T载体连接,转化大肠杆菌后筛选阳性克隆进行测序,鉴定正确后经EcoRⅠ和NheⅠ双酶切,与pcDNA6/myc-HisA载体连接,构建包膜蛋白gp140的真核表达载体(pcDNA6-ADAgp140),转化大肠杆菌后筛选阳性克隆,经PCR及酶切进行鉴定。结果获得HIV-1ADAgp140的PCR产物,构建了其真核表达载体pcDNA6-ADAgp140,经转化和筛选获得了重组菌,经PCR、酶切及基因测序结果显示序列正确,为预期目的片段。结论成功构建了ADAgp140包膜蛋白的真核表达载体。此结果为深入研究HIV包膜蛋白生物学特性及进行HIV疫苗研究提供了良好的物质基础。

主 题 词：Ⅰ型人类免疫缺陷病毒 gp140 重叠延伸剪接法 

学科分类：1007[医学-药学类] 100705[100705] 1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1000-1905.2007.04.004

馆 藏 号：203732525...