不同品系小鼠骨髓间质干细胞扩增能力及细胞表型差异的比较

作     者：郭振宇 郑芹 雷俊霞 Guo Zhen-yu;Zheng Qin;Lei Jun-xia

作者机构：中山大学附属第五医院泌尿外科广东省珠海市519000 中山大学中山医学院病理生理教研室广东省广州市510080 

基　　金：广东省自然科学基金(05300604)~~ 

出 版 物：《中国组织工程研究与临床康复》 (Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research)

年 卷 期：2008年第12卷第47期

页      码：9257-9260页

摘      要：背景:虽然近年来对小鼠骨髓间质干细胞分离培养的报道层出不穷,但就其方法而言,有的操作步骤过于繁琐,有的不适用于国内相关实验,如采用一系列抗体负选或利用自行研制的新抗体筛选。目的:拟建立简便稳定的小鼠骨髓间质干细胞体外分离和扩增的方法,并比较不同品系小鼠骨髓间质干细胞的生物学特点。设计、时间及地点:细胞学体外对比观察,于2007-04/09在中山大学中山医学院病理生理教研室完成。材料:清洁级6周龄雄性C57BL/6和BABL/C小鼠各5只,由中山大学中山医学院实验动物中心提供。方法:取两种品系小鼠双侧股骨,去除股骨上附带组织,用含10% FCS的DMEM培养基冲洗骨髓腔,过200目不锈钢网,收集骨髓细胞,用Tris-NH4Cl红细胞裂解液溶解2min,用含10% FCS的DMEM培养基调整细胞浓度,按500个细胞/孔低密度接种于24孔板,置于37℃、体积分数为0.05的CO2培养箱中。出现成纤维样细胞克隆后消化收集并移至6孔板,待细胞70%～80%融合时消化传代。主要观察指标:细胞形态和生长特点,流式细胞仪检测细胞表型,茜素红染色观察成骨诱导情况,油红O染色观察成脂诱导情况。结果:约培养2周可形成细胞克隆,经历一缓慢扩增阶段后,第6～7代细胞生长明显加快,可见形态均一的成纤维细胞群,呈典型的旋涡状生长,两种品系小鼠骨髓间质干细胞均可传至10代以上,但C57BL/6小鼠骨髓间质干细胞体外扩增能力更强。C57BL/6和BABL/C小鼠骨髓间质干细胞均呈CD45-CD11b-CD117-,CD44和Sca-1呈阳性表达,可连续表达MHC-I,少量表达CD80,此外前者可少量表达MHC-Ⅱ,而后者几乎不表达MHC-Ⅱ。两者体外均能够向成骨、成脂方向分化。结论:通过低密度培养技术可简单方便的体外分离并扩增C57BL/6和BALB/c小鼠骨髓间质干细胞。两品系小鼠骨髓间质干细胞均易向成骨成脂分化,但在扩增能力、细胞表型上略有不同。

主 题 词：骨髓间质干细胞 体外培养 扩增 C57BL/6 BALB/c 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 0831[工学-公安技术类] 1007[医学-药学类] 0403[0403] 1002[医学-临床医学类] 07[理学] 1010[医学-医学技术类] 071007[071007] 0703[理学-化学类] 0836[0836] 

D　O　I：10.3321/j.issn:1673-8225.2008.47.016

馆 藏 号：203732907...