小鼠CDK4基因RNAi慢病毒载体的构建及体外研究

作     者：降风 王雪贞 卜碧涛 张苏明 张旻 JIANG Feng;WANG Xue-zhen;BU Bi-tao;ZHANG Su-ming;ZHANG Min

作者机构：华中科技大学同济医学院附属同济医院神经内科武汉430030 内蒙古自治区医院神经内科呼和浩特010017 

基　　金：国家自然科学基金(No.3040014 No.30670737) 

出 版 物：《神经损伤与功能重建》 (Neural Injury and Functional Reconstruction)

年 卷 期：2008年第3卷第6期

页      码：371-373,392页

摘      要：目的:探讨CDK4在神经系统变性疾病中的作用,并构建携带小鼠CDK4-siRNA的慢病毒载体进行体外研究。方法:设计3个CDK4-siRNA序列和1个无关对照序列,化学合成后退火形成双链,克隆到酶切的pSIH1-H1-copGFP siRNA载体。重组质粒经PCR和测序鉴定后,脂质体介导下转染BV-2细胞,Western blot检测CDK4的表达,筛选出干扰效果最佳的pSIH1-siRNA2。将对照序列和pSIH-siRNA2分别与慢病毒包装质粒共转染293T细胞生成病毒,收集病毒上清并浓缩,测定浓度。结果:慢病毒感染BV-2细胞后可表达GFP,RT-PCR和Western blot检测CDK4的表达明显下降。结论:成功构建携带CDK4-siRNA的慢病毒载体,体外研究显示其能明显下调CDK4的表达。

主 题 词：CDK4 神经系统变性疾病 RNA干扰 慢病毒载体 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 1002[医学-临床医学类] 07[理学] 071006[071006] 100204[100204] 10[医学] 

D　O　I：10.3870/sjsscj.2008.06.001

馆 藏 号：203732916...