血管生成素1通过整合素对大鼠骨髓间充质干细胞的黏附、活力及抗凋亡影响

作     者：陈国欢 王挹青 郭晋村 Chen Guo-huan;Wang Yi-qing;Guo Jin-cun

作者机构：厦门大学附属中山医院心内科福建省厦门市361004 

基　　金：厦门市科技计划项目~~ 

出 版 物：《中国组织工程研究与临床康复》 (Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research)

年 卷 期：2009年第13卷第23期

页      码：4510-4516页

摘      要：背景：前期实验已证实骨髓间充质于细胞表面存在整合素受体，但血管生成素1是否能通过整合素受体促进骨髓间充质干细胞的生存、抗凋亡目前尚不明确。目的：探讨血管生成素1对大鼠骨髓间充质干细胞黏附、活力、抗凋亡的影响，并初步分析其信号转导机制。设计、时间及地点：细胞学体外对照观察，于2008—01/10在厦门大学附属中山医院开放实验室完成。材料：清洁级SD大鼠40只，由中科院上海实验动物中心提供。人血管生成素1为R＆D公司产品。方法：密度梯度离心结合贴壁分离法体外分离、培养大鼠骨髓间充质干细胞，第346代细胞用于实验。分别以不同的基质包被24孔培养板1h，清洗后再加入单细胞悬液，设立7组：第1组作为对照，以含0．1％牛血清白蛋白的PBS包被；第2-4组分别以玻粘连蛋白、纤维粘连蛋白、血管生成素1包被；第5-7组单细胞悬液预先分别与乙二胺四乙酸、β1抗体、RGD抗体孵育10min后再加入24孔板，行血管生成素1包被。主要观察指标：通过黏附测定、锥虫蓝染色、MTT试验、Hoechst染色和AnnexinV／PI法检测血管生成素1对骨髓间充质干细胞的黏附、活力、抗凋亡等生物学效应，结合整合索抗体和信号转导阻滞剂通过Western blotting法检测磷酸化丝氨酸，苏氨酸蛋白激酶B、总丝氨酸，苏氨酸蛋白激酶B、Bcl．2和B-actin水平。结果：成功分离培养大鼠骨髓间充质干细胞，流式细胞仪鉴定其纯度达98．3％。黏附试验显示与对照组比较，培养1，2，3d血管生成素1均能促进骨髓间充质干细胞的黏附（P〈0．01），该效应能被乙二胺四乙酸、整合索亚单位B1抗体和RGD抗体所抑制（P〈0．01）。血管生成素1能促进骨髓间充质干细胞在血清饥饿下的存活（P〈0．01）、增殖（P〈0．01）和提高磷酸化丝氨酸，苏氨酸蛋白激酶B、Bcl-2的表达来拮抗紫杉醇诱导的凋C（P〈0．01），RGD抗体能抑制上述作用。结论：血管生成素1可与整合素受体结合促进骨髓间充质干细胞的黏附、存活和增殖，并通过上调磷酸化丝氨酸，苏氨酸蛋白激酶B和Bcl-2的表达发挥抗凋亡作用。

主 题 词：骨髓间充质干细胞 血管生成素1 黏附 存活 抗凋亡 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 0831[工学-公安技术类] 1007[医学-药学类] 0403[0403] 1002[医学-临床医学类] 07[理学] 1010[医学-医学技术类] 071007[071007] 0703[理学-化学类] 0836[0836] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1673-8225.2009.23.021

馆 藏 号：203733248...