EvaGreen实时荧光定量PCR检测猪圆环病毒2型方法的建立

作     者：蔡晔 饶品彬 吴海港 姜永厚 Cai Ye;Rao Pinbin;Wu Haigang;Jiang Yonghou

作者机构：浙江理工大学生命科学学院杭州310018 

基　　金：浙江省科技攻关项目(2008C22081) 

出 版 物：《生物技术通报》 (Biotechnology Bulletin)

年 卷 期：2014年第30卷第6期

页      码：75-80页

摘      要：根据GenBank中的猪圆环病毒2型(PCV2)ORF4基因序列设计一对特异性引物,通过常规PCR扩增PCV2的ORF4基因,并将其纯化的PCR产物克隆入pMD18-T载体中,构建重组质粒。应用该重组质粒进行EvaGreen实时荧光定量PCR,建立了PCV2 DNA的标准曲线,并进行熔解曲线分析。结果显示:建立的EvaGreen实时荧光定量PCR特异性强,与其他非靶标病毒基因不发生交叉反应;灵敏度高,最高可检测到10拷贝/μL的病毒量;重复性好,3个浓度的批间和批内的变异系数均小于2.5%;对118份临床样品进行检测,阳性样品25份,阳性率为21.2%,检测结果与普通PCR相符率为99.2%,其中一份样品经荧光PCR检测为PCV2阳性,普通PCR检测为阴性。结果表明,建立的EvaGreen实时荧光定量PCR方法具有特异性强、敏感度高、重复性好、简便快捷等特点,可用于临床PCV2感染的早期诊断以及分子流行病学调查。

主 题 词：猪圆环病毒2型 EvaGreen 实时荧光定量PCR 检测 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2014.06.010

馆 藏 号：203735488...