miR-217慢病毒表达载体及稳转胶质瘤细胞系的构建

作     者：赵保 苏国军 张淑霞 吴峰 苏陈 叶晶亮 韩瑞章 郑林丰 

作者机构：解放军第98医院神经外科浙江湖州313000 湖州市药检所浙江湖州313000 解放军第98医院心血管内科浙江湖州313000 上海交通大学附属第一人民医院放射科上海200080 

基　　金：国家留学基金项目(201303810388) 上海市自然科学基金项目(12ZR1424900) 上海交通大学附属第一人民医院"优秀青年人才"基金 

出 版 物：《现代生物医学进展》 (Progress in Modern Biomedicine)

年 卷 期：2015年第15卷第14期

页      码：2625-2628页

摘      要：目的:构建mi R-217慢病毒表达载体并建立稳定表达mi R-217的胶质瘤细胞系,为深入研究mi R-217在胶质瘤细胞生长及功能中的作用及机制提供条件。方法:利用人基因组中mi R-217前体序列,设计并合成引物。采用PCR的方法扩增含mi R-217前体的目的片段,酶切后连接至慢病毒表达载体p LVX-EGFP-Puro。将带有mi R-217前体的慢病毒载体及辅助质粒用脂质体的方法转染293细胞,24小时后收集上清液测定病毒滴度。利用实时定量PCR检测mi R-217的表达水平,确定慢病毒载体的表达能力。将病毒感染胶质瘤细胞系U251,通过荧光观察和嘌呤霉素(Puromycin)筛选,获得稳定转染mi R-217的胶质瘤细胞系。结果:克隆的mi R-217前体目的片段经PCR检测和测序分析,序列完全正确、无突变。实时定量PCR检测发现慢病毒感染293T细胞后,mi R-217的表达水平明显升高(P<0.01),表明mi R-217慢病毒表达载体构建成功。经嘌呤霉素筛选后,荧光显微镜观察发现细胞均有稳定的绿色荧光表达,并且mi R-217的表达水平显著升高(P<0.01),是对照组的12.5倍。结论:成功构建了mi R-127慢病毒表达载体和稳转胶质瘤细胞系,为后续研究奠定了良好基础。

主 题 词：mi R-217 胶质瘤细胞 慢病毒 基因表达 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 1002[医学-临床医学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 100214[100214] 0836[0836] 090102[090102] 10[医学] 

D　O　I：10.13241/j.cnki.pmb.2015.14.007

馆 藏 号：203735978...