肠出血性大肠杆菌O157∶H7 EMA-PCR检测技术的建立

作     者：赵素君 谢晶 曹冶 李江凌 王秋实 叶勇刚 罗丹丹 叶健强 廖党金 Zhao Su-jun;Xie Jing;Cao Ye;Li Jiang-ling;Wang Qiu-shi;Ye Yong-gang;Luo Dan-dan;Ye Jian-qiang;Liao Dang-jin

作者机构：四川省畜牧科学研究院成都610066 

基　　金：国家科技支撑计划项目(2006BAD04A17 2012BAD12B03) 四川省科技支撑计划项目(2010NZ0106) 国家奶牛产业技术体系岗位科学家项目 四川省生猪现代产业体系项目 

出 版 物：《中国草食动物科学》 (China Herbivore Science)

年 卷 期：2012年第32卷第4期

页      码：50-53页

摘      要：肠出血性大肠杆菌O157∶H7是一种重要的人畜共患传染病病原菌。为建立一种特异、灵敏的O157∶H7新型检测技术,以O157抗原基因(rfbE基因)为模板设计特异性引物,利用叠氮溴化乙锭(ethidium monoazide bromide,EMA)处理菌液,沸水浴法制备细菌裂解液,优化PCR条件,建立一种快速、有效的O157∶H7活菌EMA-PCR检测方法。结果显示:EMA-PCR可从rfbE基因阳性菌株CVCC248和两株临床分离菌株cd0912、cd0803中扩增出大小为495 bp的特异性条带,检测灵敏度可达12 CFU/mL。经EMA处理,从含有1%～100%O157∶H7 CVCC248活菌混合悬液制备的DNA中均可扩增出目的片段。因此,成功建立了肠出血性大肠杆菌O157∶H7的EMA-PCR检测方法;该方法可避免因分析的样品中含有死细菌而造成的假阳性检测结果,检测的准确性和真实性较传统PCR大大提高。O157∶H7 EMA-PCR技术的建立为O157∶H7的临床诊断提供了新的方法,具有重要的实际应用价值和良好的应用前景。

主 题 词：肠出血性大肠杆菌 rfbE基因 EMA-PCR 死细菌 活细菌 

学科分类：090603[090603] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.3969/j.issn.2095-3887.2012.04.016

馆 藏 号：203740261...