HIV-1 Gag蛋白P2/NC蛋白酶切割位点序列的随机化及噬菌体展示

作     者：周波 贾建安 温宗梅 邓松华 蒋少华 陈秋莉 潘欣 潘卫 ZHOU Bo;JIA Jian-an;WEN Zong-mei;DENG Song-hua;JIANG Shao-hua;CHEN Qiu-li;PAN Xin;PAN Wei

作者机构：安徽医科大学病理生理学教研室合肥230032 第二军医大学基础医学部微生物学教研室上海200433 

基　　金：国家自然科学基金(30472050) 上海市科技攻关计划基金(05dz19317) 

出 版 物：《第二军医大学学报》 (Academic Journal of Second Military Medical University)

年 卷 期：2005年第26卷第11期

页      码：1243-1247页

摘      要：目的:构建HIV-1 Gag PR蛋白P2/NC切割位点序列随机化的噬菌体展示文库,研究HIV-1蛋白酶(protease PR)耐药性突变对其敏感切割序列的影响。方法:PCR扩增制备重组HIV-1gag基因上的CAP2和NC片段,在CAP2片段5′端引入StuⅠ酶切位点,3′端PR切割位点处的氨基酸序列进行随机化;在NC片段5′端设计重叠区域,3′端引入SalⅠ酶切位点。应用Overlapping PCR将CAP2和NC片段拼接并克隆于噬菌体展示载体LD3-pCANTAB5S上,建立HIV-1PR靶蛋白CAP2和NC之间切割位点随机化的噬菌体展示文库。结果:该噬菌体展示文库库容量为2.1×106,滴度为3.0×1012TU/ml,CAP2/NC片段插入率为52.1%;12个样品的序列分析显示切割位点中随机化的核苷酸与氨基酸均呈随机性分布;10个阳性单克隆噬菌体CAP2/NC-LD3-pCANTAB5S样品中9个与IgG特异结合。结论:成功地对HIV-1PR靶蛋白CAP2和NC之间切割位点进行了随机化并展示于噬菌体表面,构建了其噬菌体展示文库,为筛选耐药性突变的PR敏感切割序列及构建蛋白酶抑制剂噬菌体筛选模型打下基础。

主 题 词：HIV-1 蛋白酶 切割位点序列 随机化 噬菌体展示文库 

学科分类：1007[医学-药学类] 100705[100705] 1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3321/j.issn:0258-879X.2005.11.011

馆 藏 号：203740317...