FMDV 3C蛋白酶基因的克隆及在昆虫细胞中的表达

作     者：曹轶梅 卢曾军 孙普 孙甲川 刘在新 Yimei Cao;Zengjun Lu;Pu Sun;Jiachuan Sun;Zaixin Liu

作者机构：中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046 

基　　金：国家“973项目”--国家重大基础研究发展规划(2005CB523201) 

出 版 物：《微生物学报》 (Acta Microbiologica Sinica)

年 卷 期：2008年第48卷第3期

页      码：312-316页

摘      要：口蹄疫病毒3C蛋白酶在病毒的致病机理、聚蛋白前体的加工和RNA的复制上起着很重要的作用,是当前抗病毒研究的一个重要靶点。本研究从AsiaⅠ型FMDV适应细胞毒中提取RNA,用RT-PCR技术扩增3C基因,首先克隆到pGEM-T载体,再亚克隆到杆状病毒转移载体pMelBacB中,构建出重组转移载体pMel-3C。最后将含有目的基因的转移载体与线性化的杆状病毒DNA共转染Sf9细胞,通过噬斑筛选和PCR鉴定,获得了重组杆状病毒。重组病毒经扩增后以10个MOI感染Sf9细胞,接种病毒72h后收获细胞,样品经SDS-PAGE和Westernblot证实3C蛋白获得表达,分子量约23kDa,与预测蛋白大小一致,且能被FMDV感染阳性血清所识别。本研究为空衣壳的体外组装及新型抗病毒药物设计的研究奠定了基础。

主 题 词：FMDV 3C蛋白酶基因 Sf9细胞 杆状病毒 表达 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

核心收录：

D　O　I：10.3321/j.issn:0001-6209.2008.03.007

馆 藏 号：203742223...