原发性开角型青光眼致病基因小鼠MYOC Pro356Leu突变型质粒构建及鉴定

作     者：李春梅 卓业鸿 陈梦飞 孙雪荣 祁影 葛坚 Chunmei Li;Yehong Zhuo;Mengfei Chen;Xuerong Sun;Ying Qi;Jian Ge

作者机构：中山大学中山眼科中心眼科学国家重点实验室广州510060 

基　　金：中国国家自然科学基金项目资助(30600695/C030309) 

出 版 物：《Eye Science》 (眼科学报（英文版）)

年 卷 期：2010年第25卷第1期

页      码：57-61页

摘      要：目的:构建小鼠MYOC Pro356Leu突变型质粒及鉴定。方法:1.将含有红重组酶基因的质粒pKD46电击入RP23-180F15 BAC克隆。2.利用PCR扩增pStart-K载体,将PCR产物电穿孔入RP23-180F15 BAC红色重组细菌的MYOC基因组片段。***扩增mMyoc AfeⅠ片段,亚克隆mMyoc AfeⅠ片段进入pBluescript载体。4.设计两条寡核苷酸将Pro356Leu(C to T at codon 356)导入pBS_mMyoc AfeⅠ克隆。5.通过酶切及连接酶反应将pBS_mMyoc AfeⅠmut clone导入pStart-K_mMyoc构建成pStart-K_mMyoc mut克隆。结果:成功构建小鼠MYOC Pro356Leu突变型质粒pStart-K_mMyoc mut克隆,并经酶切及测序证实。结论:应用红重组技术及pStart-K载体克隆大片段DNA是有效的DNA克隆方法,我们所构建的MYOC Pro356Leu突变型质粒将为研究MYOC基因在原发性开角型青光眼发病中的功能和作用提供实验依据。

主 题 词：原发性开角型青光眼 MYOCPro356Leu突变 质粒构建 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100212[100212] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/g.issn.1000-4432.2010.01.015

馆 藏 号：203749331...