恒河猴粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子的基因合成、原核表达及纯化

作     者：刘娟 陈丹 李璐 刘新颖 王冉 史洪娜 王维龙 沈林 刘勇 李鼎锋 LIU Juan;CHEN Dan;LI Lu;LIU Xin-ying;WANG Ran;SHI Hong-na;WANG Wei-long;SHEN Lin;LIU Yong;LI Ding-feng

作者机构：北京安百胜生物科技有限公司北京100176 

出 版 物：《中国生物制品学杂志》 (Chinese Journal of Biologicals)

年 卷 期：2012年第25卷第3期

页      码：309-313页

摘      要：目的人工合成恒河猴粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(Macaca mulatta granulocyte-macrophage colony stimulatingfactor,mGM-CSF)基因,在大肠杆菌中高效表达并纯化。方法根据大肠杆菌遗传密码子偏爱性优化设计并合成mGM-CSF基因,克隆至原核表达载体pET-43.1a(+)中,构建重组表达质粒pET-43.1a-mGM-CSF,转化大肠杆菌BL21-CodonPlus(DE3)-RIPL,IPTG诱导表达。表达的重组mGM-CSF蛋白经Sephacryl S-200分子筛层析纯化,复性后,Western blot检测其反应原性,MTT法检测其生物学活性。结果重组表达质粒pET-43.1a-mGM-CSF经双酶切及测序证实构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为15 000,表达量约占菌体总蛋白的30%,主要以包涵体形式存在;纯化复性后的重组蛋白纯度可达95%以上,并可与大鼠抗人GM-CSF单克隆抗体特异性结合,比活性为1.2×107IU/mg。结论在大肠杆菌中高效表达了重组mGM-CSF蛋白,纯化复性后的蛋白具有良好的生物学活性。

主 题 词：恒河猴 粒细胞巨噬细胞集落刺激因子,重组 原核细胞 基因表达 纯化 生物学活性 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

核心收录：

D　O　I：10.13200/j.cjb.2012.03.58.liuj.018

馆 藏 号：203749854...