沉默MDR1基因表达逆转白血病耐药HT9细胞对大蒜素的耐药性

作     者：张伟伟 邵淑丽 张珍珠 张宇 付博 

作者机构：齐齐哈尔大学生命科学与农林学院黑龙江齐齐哈尔161006 

基　　金：黑龙江省自然科学基金资助项目(No.C200624) 黑龙江省教育厅科学技术项目资助(No.11511447 No.12511611) 齐齐哈尔大学青年教师科研启动基金资助项目(No.2011K-M38) 

出 版 物：《中国肿瘤生物治疗杂志》 (Chinese Journal of Cancer Biotherapy)

年 卷 期：2013年第20卷第1期

页      码：52-57页

摘      要：目的:利用短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)表达载体沉默耐药细胞HT9中MDR1基因表达,从而逆转人早幼粒白血病细胞株HT9对大蒜素的耐药性。方法:根据MDR1基因序列设计shRNA片段,构建靶向MDR1基因的pSilencer3.1-shMDR1表达载体,稳定转染HT9细胞,real-time PCR检测细胞中MDR1 mRNA的表达,Western blotting检测HT9细胞中P-糖蛋白(MDR1基因编码)的表达,MTT法检测细胞存活率,琼脂糖凝胶电泳检测经大蒜素处理后HT9细胞的凋亡,电镜观察细胞超微结构变化,流式细胞术检测细胞周期。结果:成功构建靶向MDR1的表达载体pSilencer3.1-shMDR1,稳定转染HT9细胞形成HT9-shMDR1细胞系,HT9-shMDR1细胞中MDR1 mRNA表达显著降低[(0.027±0.002)vs(0.110±0.005),P<0.01],P-糖蛋白表达也明显降低[(0.856±0.014)vs(1.454±0.027),P<0.05]。大蒜素对HT9-shMDR1细胞的IC50较对未转染组HT9细胞明显降低[(26.66±0.59)vs(52.75±0.64)μg/ml,P<0.01],HT9-shMDR1细胞对大蒜素耐药的相对逆转率为(49.45±1.86)%。与未转染组HT9细胞相比,经大蒜素处理后HT9-shMDR1细胞凋亡的DNA片段更为明显,电镜下可见细胞凋亡特有的半月体形成。大蒜素处理不影响未转染组HT9细胞和对照质粒转染后HT9细胞(HT9-neo细胞)的细胞周期,但大蒜素处理使HT9-shMDR1细胞的S期细胞比例减少[(31.40±2.13)%vs(53.80±1.87)%,P<0.01],G2/M期细胞比例增多[(35.62±2.06)%vs(9.37±2.09)%,P<0.01]。结论:靶向MDR1的干扰表达载体pSilenc-er3.1-shMDR1能够抑制MDR1基因的表达,从而逆转HT9细胞对大蒜素的耐药性。

主 题 词：白血病细胞 HT9细胞 MDR1基因 短发夹RNA 多药耐药 大蒜素 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

D　O　I：10.3872/j.issn.1007-385x.2013.01.009

馆 藏 号：203750214...