靶向 survivin 基因的 shRNA 慢病毒载体的构建及其对膀胱癌 EJ 细胞凋亡的影响

作     者：陶燕 付生军 洪梅 王志平 马宝良 卢建中 TAO Yan;FU Shengjun;HONG Mei;WANG Zhiping;MA Baoliang;LU Jianzhong

作者机构：兰州大学第二医院泌尿外科研究所甘肃省泌尿系统疾病研究重点实验室甘肃省泌尿系临床医学中心甘肃兰州730030 

基　　金：甘肃省科技计划项目(1308RJYA056) 甘肃省泌尿系疾病临床医学中心开放课题基金项目(mnlczxkf-28) 兰州大学中央高校基本科研业务费项目(lzujbky-2014-165) 

出 版 物：《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 (Journal of Jinan University(Natural Science & Medicine Edition))

年 卷 期：2015年第36卷第3期

页      码：239-245页

摘      要：目的:构建survivin基因特异性shRNA慢病毒干扰载体,转染膀胱癌EJ细胞,研究survivin基因在膀胱癌细胞株中的表达抑制情况,观察survivin shRNA慢病毒载体对EJ细胞凋亡的影响.方法:以survivin基因为靶标设计shRNA干扰序列,克隆至p SIH1-H1-cop GFP慢病毒载体.干扰载体鉴定正确后转染膀胱癌细胞株EJ细胞,荧光显微镜下观察GFP表达情况,实时荧光定量PCR检测survivin基因mRNA含量变化,Western blotting法检测survivin蛋白表达,Annexin V-FITC/PI双染法检测EJ细胞凋亡情况.结果:PCR扩增鉴定、DNA测序证实survivin慢病毒干扰载体构建成功;EJ细胞经干扰载体处理后,EJ细胞survivin基因mRNA水平下调了73.33%,蛋白表达受到显著抑制,EJ细胞凋亡率达到24.39%.结论:成功构建了靶向survivin基因的shRNA重组慢病毒干扰载体,可以显著降低转染细胞survivin基因的表达水平,并有效提高膀胱癌细胞凋亡率.

主 题 词：载体构建 survivin 短发卡状RNA(shRNA) 膀胱癌 细胞凋亡 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

D　O　I：10.11778/j.jdxb.2015.03.009

馆 藏 号：203751385...