多重PCR方法检测大肠杆菌O157∶H7的初步研究

作     者：朱文冠 薛素强 洪洁心 崔剑峰 郭霄峰 ZHU Wen-guan;XIE Shu-qiang;HONG Jie-xin;CUI Jian-feng;GUO Xiao-feng

作者机构：华南农业大学兽医微生物教研室广州510642 广东出入境检验检疫局 广东省东莞市兽医防疫检疫站 

基　　金：广东省攻关项目(2002B21406) 广州市攻关项目(GK0401001)资助 

出 版 物：《中国人兽共患病学报》 (Chinese Journal of Zoonoses)

年 卷 期：2006年第22卷第5期

页      码：428-432页

摘      要：目的研究一种快速、特异的检测大肠杆菌O157∶H7的多重PCR方法。方法以大肠杆菌O157∶H7的O157抗原基因(rfbE基因)、鞭毛H7抗原基因(fliC基因)、粘附素基因(eaeA基因)和志贺样毒素Ⅰ、Ⅱ(SLT-Ⅰ、SLT-Ⅱ基因)为扩增对象,设计能导至目的片段大小不同的5对引物,通过优化条件,建立了可用于粪便检测的大肠杆菌5重PCR。结果在同一扩增体系中,检测了5株不同来源的大肠杆菌O157∶H7及27株非大肠杆菌O157∶H7细菌。结果表明,该方法能从2株大肠杆菌O157∶H7中扩增出rfbEf、liC、eaeA、SLT-Ⅰ、SLT-Ⅱ基因,它们的大小分别为582 bp、802 bp、487 bp3、68 bp和177 bp。而另外3株大肠杆菌O157∶H7也能扩增出除eaeA、SLT-Ⅱ基因外的其它3个基因片段。表明该方法可用于检测大肠杆菌O157∶H7,还可检测细菌是否含有毒素基因。在检测27株非大肠杆菌O157∶H7,除O149出现SLT-II扩增产物和O1∶H7出现fliC基因扩增产物外,其它非大肠杆菌O157∶H7的扩增结果均为阴性,表明该方法有较高的特异性。当粪便样品经增菌培养12 h,用该5重PCR体系能检测出最初接种量为5cfu/g粪便的样品。结论本5重PCR方法具有较高的特异性和敏感性,可迅速、有效地将大肠杆菌O157∶H7与其它非大肠杆菌O157∶H7相区别,同时还能检测O157∶H7中的毒力因子。因此,通过进一步研究,本方法有望应用于临床大肠杆菌O157∶H7感染的辅助诊断。

主 题 词：大肠杆菌O157 H7 PCR rfbE基因 fliC基因 eaeA基因 SLT-Ⅰ基因 SLT-Ⅱ基因 

学科分类：1007[医学-药学类] 100705[100705] 1004[医学-公共卫生预防医学类] 1001[医学-基础医学] 100103[100103] 100401[100401] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3969/j.issn.1002-2694.2006.05.011

馆 藏 号：203758457...