单核细胞化学吸引蛋白质1小分子干扰RNA人肾小管上皮细胞株的建立

作     者：刘娜 严海东 李雪竹 LIU Na;YAN Hai-dong;LI Xue-zhu

作者机构：同济大学附属东方医院肾内科上海200120 

出 版 物：《中华肾脏病杂志》 (Chinese Journal of Nephrology)

年 卷 期：2007年第23卷第4期

页      码：251-256页

摘      要：目的 建立单核细胞化学吸引蛋白质1（MCP-1）小分子干扰RNA（siRNA）人肾小管上皮细胞株，并检测MCP-1 siRNA对人肾小管上皮细胞（HKC）MCP-1基因的抑制效应。方法 针对人MCP-1mRNA67、116、142位点设计并合成3对MCP-1siRNA序列。构建MCP-1特异性siRNA真核表达载体，以脂质体法瞬时转染至HKC。转染24h后分别应用实时定量RT-PCR及Western印迹技术检测HKC内MCP-1mRNA、蛋白表达，筛选出抑制效率最高的MCP-1siRNA。以筛选出的MCP-1siRNA序列构建慢病毒穿梭质粒。使用慢病毒穿梭质粒进行慢病毒颗粒的包装和生产，得到病毒液并确定其滴度。以病毒液感染HKC，筛选MCP-1siRNA人肾小管上皮细胞株，并应用实时定量RT-PCR及Western印迹技术检测HKC内MCP-1mRNA、蛋白表达。结果 成功建立MCP-1特异性siRNA人肾小管上皮细胞株。MCP-1siRNA稳定转染能下调人肾小管上皮细胞MCP-1mRNA（68．49±6．38）％、蛋白（72．97±6.13）％，与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．01）。结论 MCP-1特异性siRNA能高效抑制HKC内MCP-1基因表达。MCP-1 siRNA人肾小管上皮细胞株的建立为MCP-1基因功能及肾间质纤维化防治研奔提供宴验材料和依据。

主 题 词：单核细胞化学吸引蛋白质1 RNA,小分子干扰 纤维化 人肾小管上皮细胞 转染 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100210[100210] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3760/j.issn:1001-7097.2007.04.010

馆 藏 号：203763174...