人分化抑制因子3基因靶向微小分子RNA表达载体的构建及筛选

作     者：陈芳芳 李晓军 庞小娟 赵晓琴 罗冰 虞伟 

作者机构：第二军医大学南京临床医学院(南京军区南京总医院)解放军临床检验医学研究所南京医学硕士研究生210002 

基　　金：江苏省"科教兴卫"医学重点人才基金(RC2007117) 南京军区医药卫生科研项目重点课题(07Z032) 

出 版 物：《医学研究生学报》 (Journal of Medical Postgraduates)

年 卷 期：2010年第23卷第4期

页      码：372-376页

摘      要：目的人分化抑制因子3(inhibitor of differentination 3,Id3)基因在A549细胞中的外源性表达能抑制细胞生长并诱导细胞凋亡。文中旨在构建靶向人Id3基因的微小分子RNA(miRNA)表达载体,观察miRNA对A549细胞中Id3表达的下调作用,为进一步探讨Id3基因在A549细胞生长调控中的作用机制提供一定实验依据。方法依据miRNA设计原则,针对人Id3基因的mRNA序列,设计并合成编码miRNA的2条寡核苷酸序列,经退火成互补双链,再克隆至pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR真核表达载体中,构建含靶向人Id3基因的miRNA表达质粒(pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR-Id3),DNA测序验证后,采用Lipofectamine2000TM脂质体转染技术将该质粒导入A549细胞。荧光倒置显微镜下观察miRNA干扰质粒转染A549细胞后EGFP的表达情况,应用RT-PCR和Western blot方法分别检测miRNA干扰后Id3mRNA及蛋白水平的表达。结果DNA测序表明重组质粒pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR-Id3构建正确,将其成功导入A549细胞后,在Id3mRNA水平和蛋白表达水平均有不同程度的抑制作用。结论成功构建了针对人Id3基因的4组pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR-Id3miRNA表达载体,其中,SRId3-1干扰组在mRNA水平和蛋白表达水平均能有效抑制A549细胞Id3的表达。

主 题 词：微小分子RNA 人分化抑制因子3 肺腺癌 A549 RNA干扰 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 071007[071007] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1008-8199.2010.04.008

馆 藏 号：203764337...