利用SMART技术构建中国人肝组织cDNA酵母双杂交文库

作     者：叶晓霞 霍克克 陈东 梁艳清 YE Xiao-xia;HUO Ke-ke;CHEN Dong;LIANG Yan-qing

作者机构：广东医学院组织胚胎学教研室广东湛江524023 复旦大学生命科学院遗传研究所上海200433 

基　　金：广东省卫生厅医学科研基金资助课题(B2009192) 

出 版 物：《吉林大学学报（医学版）》 (Journal of Jilin University：Medicine Edition)

年 卷 期：2010年第36卷第6期

页      码：1175-1180页

摘      要：目的:针对人类肝脏蛋白质组计划中大规模基因克隆及构建肝脏蛋白相互作用图谱的研究需要,改造酵母双杂交载体pPC86和pDBleu,并构建中国人肝组织cDNA文库,为肝脏蛋白质组计划的研究奠定基础。方法:设计并合成特定寡核苷酸序列,经过处理形成具有黏性末端的双链DNA片段,插入到pPC86、pDBLeu载体相应的酶切位点处,从而获得改造的新载体。利用改造后的载体、中国人正常肝组织mRNA和Clontech公司SMART文库构建试剂盒构建NpDBLeu-cDNA文库。结果:酶切鉴定和DNA测序证实改造后载体插入位点和序列正确,成功获得新载体NpPC86和NpDBLeu。滴度测试表明,所构建NpDBLeu肝组织cDNA文库容量为1.93×106cfu,转化子重组效率为95.2%,扩增文库达到109cfu·mL-1。结论:利用SMART技术成功构建了中国人肝组织cDNA酵母双杂交文库。

主 题 词：SMART技术 肝组织 载体改造 cDNA文库 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

核心收录：

D　O　I：10.13481/j.1671-587x.2010.06.007

馆 藏 号：203764600...