甘蔗黄叶病毒CP蛋白基因ihpRNA表达载体构建及烟草转化

作     者：张雨良 熊国如 王健华 张树珍 官梅花 杨文君 刘志昕 

作者机构：中国热带农业科学院热带生物技术研究所农业部热带作物生物技术重点开放实验室海口571101 

基　　金：国家科技支撑计划项目(2007BAD48B01) 中央级公益性科研院所基本科研业务专项(ITBBZD1051) 现代农业产业体系建设专项资金(nycytx-24) 

出 版 物：《植物研究》 (Bulletin of Botanical Research)

年 卷 期：2011年第31卷第5期

页      码：537-542页

摘      要：为提高甘蔗抗病性,本研究根据甘蔗黄叶病毒海南分离物ScYLV-CHN-HN1全基因组序列(GenBank ***342888),利用病毒CP蛋白介导的RNAi技术,针对病毒外壳蛋白CP,设计两对含有酶切位点的特异性引物,CPsf1/CPsr1和CPasf1/CPasr1,以构建好的pMD19-T/CP质粒为模板,pRNAi1017为中间载体,分别合成构建干扰载体的正反向片段pRNAi-CP-F-R,将CP正反向片段分别插入表达载体pCAMBIA2300的相应位置,构建含有发卡结构的RNAi载体p2300-CP-F-R,经过PstⅠ酶切鉴定,证明载体构建成功。通过农杆菌介导的方法,以干扰表达载体p2300-CP-F-R转化烟草,经过PCR检测,得到12株阳性转基因植株,Southern blot杂交和半定量RT-PCR对其检测,证明干扰片段已经整合烟草基因组中并进行了转录,该结果为RNAi介导抗病毒甘蔗育种研究奠定基础。

主 题 词：甘蔗黄叶病毒 CP外壳蛋白 RNA干扰 ihp表达载体 烟草转化 

学科分类：09[农学] 0901[农学-植物生产类] 

核心收录：

馆 藏 号：203764929...