定量检测Hp cagA基因内参标模板的构建及测序

作     者：韩锋产 阎小君 侯瑜 苏成芝 肖乐义 郭晏海 崔大祥 李陕区 Feng Chan Han;Xiao Jun Yan;Yu Hou;Cheng Zhi Su;Le Yi Xiao;Yan Hai Guo;Da Xiang Cui;Shan Qu Li

作者机构：中国人民解放军第四军医大学全军基因诊断技术应用研究所陕西省西安市710033 

出 版 物：《世界华人消化杂志》 (World Chinese Journal of Digestology)

年 卷 期：2000年第8卷第2期

页      码：131-134页

摘      要：目的 构建竞争性定量PCR检测幽门螺杆菌(Hp)cagA基因的内参标模板并做序列测定。 方法 根据cagA基因及Lac Ⅰ蛋白的特异性结合部位的序列,设计二对PCR引物(cagAp1,cagAp2,cagAp3,cagAp4)。其中cagAp1及cagAp3用于扩增cagA基因2593～2788位碱基间196bp的片段,cagAp2及cagAp4用于扩增2789～2993位碱基之间204bp的核酸片段;在cagAp1的5′-端引入了BamHⅠ的限制性酶切位点,在cagAp2的5′-端结合了Sal Ⅰ的限制性酶切点。在cagAp3的5′-端引入Lac Ⅰ蛋白的特异性结合序列(21bp),在cagAp4的5′-端结合了cagAp3之5′-端21个碱基的反义DNA序列。利用重组PCR,将乳糖操纵子中Lac Ⅰ蛋白的特异性结合序列重组入cagA基因400Lp的片段中,得到cagA基因片段的重组体(rfcagA)。将重组rfcagA定向克隆入pUC19进行序列测定。 结果 用DNA序列分析仪双向测定rfcagA的序列,其含400bp的cagA片段及Lac Ⅰ蛋白特异性结合部位的序列(21bp),一级结构完全正确。 结论 内参标模板rfcagA构建,对竞争性定量PCR检测Hp cagA基因的方法的建立具有重要价值。

主 题 词：幽门螺杆菌 乳糖操纵基因 检测 PCR cagA 

学科分类：1001[医学-基础医学] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1009-3079.2000.02.003

馆 藏 号：203765228...