NEDD9基因miRNA干扰质粒的构建及鉴定

作     者：李羚 赵金朋 冯锦 谢海彬 尹勇 吴雨岗 李忠 

作者机构：常州市第一人民医院(苏州大学附属第三医院)胃肠外科江苏省213000 

基　　金：常州市卫生局重大课题(ZD200906) 常州市科技局项目(CJ20140047) 

出 版 物：《江苏医药》 (Jiangsu Medical Journal)

年 卷 期：2016年第42卷第2期

页      码：133-136,F0002页

摘      要：目的构建神经元表达发育下调基因9(NEDD9)特异性微小核糖核酸(miRNA)干扰质粒,检测其在胃癌SGC-7901细胞中的干扰效果。方法根据GenBank中提供的NEDD9基因序列,设计4种NEDD9靶向干扰序列(MR0112-1、MR0112-2、MR0112-3和MR0112-4)及1种阴性对照干扰序列(MR0112-N),连接到pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR载体中,构建重组质粒。重组质粒转染人胃癌细胞株SGC-7901;采用FQ-PCR和Western blot法检测转染前后SGC-7901细胞中NEDD9mRNA及蛋白的表达。结果测序表明,4种干扰质粒的干扰序列及读框完全正确。FQ-PCR和Western blot结果显示,转染MR0112-1、MR0112-2、MR0112-3和MR0112-4质粒后其NEDD9表达较未处理组分别下降88.01%、96.70%、78.55%和81.34%(P0.05)。结论成功构建了NEDD9干扰质粒,为进一步研究NEDD9基因表达在胃癌增殖、迁移、侵袭过程中的作用提供实验基础。

主 题 词：神经元表达发育下调基因9 胃癌 微小核糖核酸 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

D　O　I：10.19460/j.cnki.0253-3685.2016.02.003

馆 藏 号：203767028...