鸡传染性法氏囊病毒实时qRT-PCR检测方法的建立及初步应用

作     者：周欣 杨霞 赵军 常洪涛 王新卫 陈陆 王川庆 

作者机构：河南农业大学牧医工程学院郑州市450002 

基　　金：国家农业科技成果转化基金(2011GB2D000007) 国家自然科学基金(30972187) 

出 版 物：《病毒学报》 (Chinese Journal of Virology)

年 卷 期：2012年第28卷第4期

页      码：424-430页

摘      要：根据高效培养鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)时对病毒滴度检测的需要,本文针对IBDV VP4基因的保守序列设计并合成了一对引物,以所构建的重组质粒作为阳性标准品,建立了检测IBDV核酸载量的SYBR Green I荧光定量实时RT-PCR(qRT-PCR)方法,结果表明,其Ct值与标准品模板在4.03×101～109拷贝/μL范围内呈良好的线性关系,对IBDV核酸的最低检出量为40拷贝/μL,灵敏度是常规RT-PCR检测方法的1 000倍;该方法不与其它禽源病毒发生交叉反应,批内变异系数小于0.5%。应用本方法对DF-1细胞中IBDV的增殖滴度进行了测定,并与经典的TCID50测定方法进行了比较。结果显示两种方法测定的IBDV在微载体悬浮培养和方瓶静态培养条件下DF-1细胞上的增殖曲线都具有一定的平行关系,且qRT-PCR方法比TCID50方法更加快速和敏感,更适合于对IBDV增殖滴度的实时快速测定。

主 题 词：鸡传染性法氏囊病毒 DF-1细胞 QRT-PCR TCID50 增殖滴度 

学科分类：090601[090601] 1002[医学-临床医学类] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

核心收录：

D　O　I：10.13242/j.cnki.bingduxuebao.002300

馆 藏 号：203770950...