H5N1虎源流感病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立及临床应用

作     者：侯小强 夏咸柱 高玉伟 薛琳 王铁成 HOU Xiao-qiang;XIA Xian-zhu;GAO Yu-wei;XUE Lin;WANG Tie-cheng

作者机构：吉林大学畜牧兽医学院吉林长春130062 解放军军事医学科学院军事兽医研究所吉林长春130062 

出 版 物：《畜牧与兽医》 (Animal Husbandry & Veterinary Medicine)

年 卷 期：2006年第38卷第9期

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摘      要：根据本室分离获得的虎源H5N1流感病毒的HA基因序列测定结果。结合GenBank中报道的H5亚型禽流感病毒HA基因序列进行同源性比较分析。选择保守序列区作为扩增区域，利用Primer5．0引物设计软件和BLAST软件程序设计出特异性扩增引物。采用成本较低、不需要特异探针引物、优化周期短。能区分病毒变异株的SYBR GreenⅠ随机掺入法建立定量PCR反应体系，并对反应条件进行优化。试验结果表明应用该方法对虎源H5流感病毒的检测具有高度的特异性，检测的灵敏度为10^1-10^2拷贝数。对20份病死老虎临床病料和24份人工感染的小鼠脏器病料用荧光定量RT-PCR方法、常规RT-PCR方法和病毒分离方法进行检测。荧光定量RT-PCR方法检测结果略高于常规RT-PCR方法，但与病毒分离方法结果相一致。这说明荧光定量RT—PCR方法可以对临床上H5N1虎源流感病毒检测提供参考。

主 题 词：HSN1虎源流感病毒 荧光定量RT-PCR 检测方法 

学科分类：090603[090603] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.3969/j.issn.0529-5130.2006.09.001

馆 藏 号：203773254...