共检猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒和猪轮状病毒的cDNA芯片的技术优化

作     者：胡靖飞 尹人杰 黄小波 刘志鹏 赵玉佳 曹三杰 文心田 文翼平 赵勤 伍锐 HU Jingfei;YIN Renjie;HUANG Xiaobo;LIU Zhipeng;ZHAO Yujia;CAO Sanjie;WEN Xintian;WEN Yiping;ZHAO Qin;WU Rui

作者机构：四川农业大学动物医学院猪病研究中心成都611130 农业部兽用药物与兽医诊断技术四川科学观测实验站成都611130 四川农业大学国家级动物类实验教学示范中心成都611130 

基　　金：国家重点研发计划(2016YFD0500700) 动物疫病共检测服务平台建设项目(D171100002117002) 

出 版 物：《四川农业大学学报》 (Journal of Sichuan Agricultural University)

年 卷 期：2019年第37卷第4期

页      码：542-549,578页

摘      要：【目的】对前期构建的猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和A型猪轮状病毒(PoRVA)共检cDNA芯片进行技术创新和关键参数优化。【方法】根据靶基因PEDV(S和M)、TGEV(N和S)以及PoRVA的(VP7和NSP4)分别设计6对特异性引物,扩增探针制备芯片阵列。重点改进了样品标记技术,引物直接标记与不对称PCR扩增结合,确定了不对称PCR扩增体系;并对点样缓冲液、水合时间、探针浓度、杂交时间和温度、清洗和干燥方式等条件进行优化。【结果】当博奥和百傲两种缓冲液比例为1∶1,水合时间为4 s,探针浓度为600 ng/μL,不对称PCR上下游引物比为1∶40,在48℃杂交3 h,用0.2%SDS清洗,1 000 r/min离心,该cDNA芯片效果最佳。【结论】本研究确定了PEDV-TGEV-GAR共检cDNA芯片的关键技术参数,为开展基因芯片的标准化制备和应用奠定了基础。

主 题 词：猪腹泻病毒 cDNA芯片 直接标记法 不对称PCR 优化 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 1007[医学-药学类] 100705[100705] 07[理学] 071005[071005] 10[医学] 

D　O　I：10.16036/j.issn.1000-2650.2019.04.016

馆 藏 号：203773967...