汉坦病毒S片段标准品构建及在荧光定量PCR检测中的应用

作     者：周欣 李燕婷 瞿涤 ZHOU Xin;LI Yan-ting;QU Di

作者机构：复旦大学上海医学院生物医学研究院&病原微生物研究所医学分子病毒学教育部和卫生部重点实验室上海200032 上海市疾病预防控制中心上海200336 

出 版 物：《环境与职业医学》 (Journal of Environmental and Occupational Medicine)

年 卷 期：2007年第24卷第2期

页      码：147-149页

摘      要：[目的]构建汉坦病毒S片段标准品,并建立以特异性荧光探针为特点的TaqMan荧光定量PCR方法检测汉坦病毒核酸。[方法]对76-118株的S片段基因进行序列分析,利用引物设计软件设计出一对引物和一条荧光探针,逆转录为cDNA,经PCR扩增,产物纯化后与PMD 18-T Vector连接,转化到大肠杆菌DH5a,筛选得到标准品的质粒,提取质粒并进行定量。在S片段的保守区设计引物和TaqMan探针,对real-time PCR条件进行优化,并提取急性期发病病人总RNA,逆转录为cDNA,与标准品同时检测。[结果]该方法制备的质粒标准品应用于汉坦病毒早期检测,能对检测样品进行质量控制;应用荧光定量PCR检测急性期病人病毒含量,具有高特异性和灵敏度,从病毒核酸提取至检测完成仅需3h左右,重复性好,并能对病毒准确定量。[结论]汉坦病毒荧光定量标准品和TaqMan荧光定量PCR方法特异、敏感、快速,适用于汉坦病毒的早期检测;汉坦病毒S片段编码的核衣壳蛋白(NP)是流行性出血热早期诊断的理想抗原。

主 题 词：荧光定量PcR 标准品 TaqMan针 S片段 汉坦病毒 

学科分类：12[管理学] 1204[管理学-公共管理类] 120402[120402] 1004[医学-公共卫生预防医学类] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1006-3617.2007.02.006

馆 藏 号：203778584...