蓝舌病病毒和流行性出血病病毒双重荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用

作     者：杨振兴 朱建波 李占鸿 李卓然 何于雯 谢佳芮 李华春 廖德芳 杨恒 YANG Zhen-xing;ZHU Jian-bo;LI Zhan-hong;LI Zhuo-ran;HE Yu-wen;XIE Jia-rui;LI Hua-chun;LIAO De-fang;YANG Heng

作者机构：云南省畜牧兽医科学院云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室云南昆明650224 

基　　金：国家重点研发计划项目(2017YFC1200505,2016YFD0500908) 云南省中青年学术和技术带头人后备人才培养项目(2017HB055) 

出 版 物：《中国兽医科学》 (Chinese Veterinary Science)

年 卷 期：2019年第49卷第9期

页      码：1104-1111页

摘      要：为建立检测蓝舌病病毒(BTV)和流行性出血病病毒(EHDV)的快速诊断方法,笔者根据BTV的第10基因节段(Seg-10)和EHDV的第5基因节段(Seg-5)序列,分别设计BTV与EHDV的特异性引物和TaqMan探针,经过反应条件优化,建立了同时检测两种病毒的双重荧光定量RT-PCR方法,并进行了特异性、灵敏度、重复性和临床样品检测验证。用该方法对BTV Seg-10和EHDV Seg-5节段的体外转录ssRNA为模板绘制标准曲线,相关系数(R^2)均大于0.995,线性关系较好;该方法可检测不同血清型的BTV和EHDV,与阿卡斑病病毒(AKAV)、中山病病毒(CHUV)、小反刍兽疫病毒(PPRV)、口蹄疫病毒(FMDV)和牛流行热病毒(BEFV)无交叉反应,表明该方法特异性强;对2种标准品的检出极限均为10 copies/uL,比常规RT-PCR敏感性高10倍;组内和组间重复试验的变异系数均小于2%;用所建立的双重荧光定量RT-PCR方法及常规RT-PCR方法,对100份血液样品和50份病毒液分别进行检测,符合率均大于90%。以上结果表明所建立的双重荧光定量RT-PCR方法具有快速、准确、敏感和稳定等优点,为BTV和EHDV感染的早期快速诊断、高通量检测及流行病学调查提供了有效的技术方法。

主 题 词：蓝舌病病毒 流行性出血病病毒 双重荧光定量RT-PCR 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.16656/j.issn.1673-4696.2019.0150

馆 藏 号：203779343...