水蜜桃E3泛素连接酶PpARI1基因的克隆及表达载体构建

作     者：苑婕 马方玮 李梦云 曹庆 郑伟尉 万嗣宝 YUAN Jie;MA Fangwei;LI Mengyun;CAO Qing;ZHENG Weiwei;WAN Sibao

作者机构：上海大学生命科学学院上海市能源作物育种及应用重点实验室上海200444 浙江农业大学农业与食品科学学院浙江省农产品品质改良技术研究重点实验室杭州311300 

出 版 物：《上海大学学报（自然科学版）》 (Journal of Shanghai University:Natural Science Edition)

年 卷 期：2019年第25卷第4期

页      码：604-611页

摘      要：以新鲜水蜜桃为材料,根据NCBI中预测的桃E3泛素连接酶ARI1基因序列设计引物,通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)克隆该序列.利用双酶切定向连接的方法将PpARI1基因开放阅读框(open reading frame,ORF)正向重组到表达载体pCAMBIAy1300的XbaⅠ和BamHⅠ酶切位点之间,并用热激法转化到农杆菌感受态细胞中.成功克隆出的长度为1 764 bp的PpARI1基因CDS序列,与预测基因序列的一致性高达99.83%.对重组子测序结果表明,PpARI1基因ORF准确插入pCAMBIAy1300载体的启动子和终止子之间,表明载体构建成功.PCR检测结果也表明,该重组载体已成功转入农杆菌中.这为下一步更深入地研究水蜜桃PpARI1基因的功能奠定了实验基础.

主 题 词：水蜜桃 E3泛素连接酶 克隆 表达载体构建 

学科分类：09[农学] 0902[农学-自然保护与环境生态类] 090201[090201] 

D　O　I：10.12066/j.issn.1007-2861.1949

馆 藏 号：203779647...